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2702 中国卫生检验杂志2009年 11月第 19卷 第 ll期 ChineseJournalofHealthLaboratoryTechn。1o科 Nov2009；Vol19 N0 11 ， 【暴发流行事例检测】 一 起由金黄色葡萄球菌致类似炭疽症状的皮肤软组织感染的调查 李丽婕，刘维华，赵冬，徐保红，韩秀兰 (石家庄市疾病预防控制中心 ，石家庄 050011) [关键词] 炭疽；软组织感染；金黄色葡萄球菌 [中图分类号】 R378．11 [文献标识码] B [文章编号] 1004—8685(2009)11—2702—02 2008年 l0月 18日，本市传染病院上报一例疑似皮肤炭 1．2．6 API鉴定实验 ：用纯培养物严格按照法国梅里埃公司 疽病例，市疾控 中心组织人员对病人进行了流行病学调查。 的API鉴定系统说 明书操作 ，利用鉴定软件使用数据库 病人基本情况：病人为男性，6o岁，河北省藁城人，农 民，于 (V40)进行鉴定 。 2008年 1O月8日，发现右手背出现指凹性水肿，后出现 白疱， 1．2．7 生化鉴定：用纯培养物进行血浆凝固酶和甘露醇实 先到村诊所看病，消炎药治疗 ，后到乡卫生院输液五天，未见 验 。 好转，且病变部位变成黑疤状，体温为37．1oC，无明显接触史。 1．2．8 PCR鉴定 于2008年 10月 17日至藁城中医院住院，18日转至石家庄市 1．2．8．1 DNA提取：取纯培养物接种 营养 肉汤，36~(2培养 传染病医院住院，临床大夫根据病人症状在门诊作了引流术 ， 24h后 ，取培养液 500 加入 1．5ml离心管中，10000rpm离 引流物经镜检未发现革兰阳性大杆菌。为进一步确诊病因， 心 5rain，弃上清，在沉淀中加入 10％ Chelex100的TE溶液 石家庄市疾病预防控制中心微生物所对病人引流物进行了培 (pH8．0)50 ，震荡混匀，短暂离心 ，沸水浴 10min，12000rpm 养鉴定。 离心 5rain，取上清，作为DNA模板分装保存于一20℃。 1．2．8．2 PCR扩增和焦磷酸测序参考文献 进行。 1 材料与方法 1．1 材料 2 结果分析 1．1．1 样品来源 无菌操作取病人患处引流物。 2．1 培养结果 1．1．2 主要试剂仪器 VITEK32全 自动微生物鉴定系统及 炭疽杆菌为革兰阳性大杆菌，几个菌相连接成竹节状 J， GPI卡 (法国梅里埃公司)、法国梅里埃公司APIStaph试剂条。 在人工培养基中或于氧气充足、温度适宜 (25~C～30~C)的条 菌株核酸提取用 Chelex一100购 自Sigma公 司，PCR扩增用 件下易形成芽胞 ，芽胞为椭圆形，位于菌体 中央或稍偏端，小 GoTaqMasterMix购 自Promega公司，焦磷酸测序用酶、底物及 于菌体宽度。由病人采取的标本和含有血清的培养基上培养 各种dNTP购 自瑞典Biotage公司，测序单链制备过程所用链 物涂片可见荚膜…。在普通营养琼脂培养基上形成粗糙型菌 酶亲和素磁珠 (Sepharosebeads)、绑定缓冲液 (BindingBuff- 落。菌落隆起，在一侧或两侧有短尾样突出，置50—100倍显 er)、复性缓冲液 (AnnealingBuffer)、变性缓冲液 (Denaturation 微镜下观察，边缘呈卷发状。在血琼脂平板上生长不溶血 。 Buffer)、洗液 (WashingBuffer)均购 自瑞典 Biotage公司，DNA 在普通肉汤培养 18～42 h，管底有絮状沉淀生长，无菌膜，肉 分子量标准 (100—6O0bp)购 自天根生化科技 (北京)有限公 汤管上液澄清 。病人引流物和血平板上的