实时荧光RT-PCR检测香蕉苞片花叶病毒方法的建立.pdfVIP

第 36卷 第 5期 植 物 保 护 学 报 Vo1．36 No．5 2009钲 1O 月 ACTA PHYT0PHYLACICA SINICA 0ct． 2009 实时荧光 RT-PCR检测香蕉苞片 花叶病毒方法的建立 闻伟刚 谭 钟 张 颖 (宁波出入境检验检疫局 ，宁波 315012) 摘要：香蕉苞片花叶病毒(Bananabractmosaicvirus，BBrMV)是我 国对外检疫性有害生物。为防 止该有害生物传入我国，根据BBrMV不同分离株外壳蛋 白基因(coatprotein，cP)的保守序列，设 计特异性引物与TaqMan荧光探针，建立 了BBrMV的实时荧光 RT-PCR检测方法。结果表明，该方 法检测BBrMV的2个不同来源毒株，均能够得到典型扩增曲线，ct值分别为26．65和27．52；而马 铃薯Y病毒、李属坏死环斑病毒以及桃丛簇花叶病毒等其它毒株则没有典型扩增曲线，也无ct值。 灵敏度比较发现，该方法比普通RT—PCR检测方法的灵敏度提高 1000倍，具有快速、灵敏和高特异 性的优点，适合对 BBrMV的检测。 关键词：香蕉苞片花叶病毒；TaqMan探针；实时荧光RT—PCR；检测 Detection ofBananabractmosaicvirusby real-time fluorescentRT-PCR WenWeigang TanZhong ZhangYing (NingboEntry—ExitInspectionandQuarantineBureau，Ningbo315012，ZhejiangProvince，China) Abstract：Bananabractmosaicvirus(BBrMV)isaquarantinepestsissuedbyChinesegovernment．To preventthespreadofthepests，areal—timefluorescentRT-PCRmethodwasestablishedbasedonspecific primersandTaqManprobewhich designedwiththeconservativesequencesofthecoatproteingenesof differentBBrMV isolates．Specificitystudyshowedthattypicalamplificationcurvescouldbeobtainedfor thetwoBBrMV strains，withCtvaluesof26．65and27．52；andnotypicalamplificationcurveobtained ofrPotatoyvirus，Plumpoxvirus，Prunusnecroticringspotvirus，Peachrosettemosaicvirusandothervi— ruses．Thesensitivityofthismethodwas1000timeshigherthanofregularRT—PCR．Thus，thereal—time fluorescentRT．PCR iSarapid，sensitiveandhighlyspecificmethodofrthedetectionofBBrMV． Keywords：BBrMV ；TaqManprobe；real—timefluorescentRT—PCR；detection 香蕉苞片花叶病毒 (Bananabractmosaicvirus， 感病植株的无性繁殖材料传播 J。目前，BBrMV主 BBrMV)属于马铃薯 Y病毒属，病毒粒子线形，长 要分布于菲律宾和印度等国，在我国尚未见发生，是 660～760nm，直径 12nm，主要侵染芭蕉属植物。该