脂质体电化学发光免疫传感器用于人IgG的检测.pdfVIP

第33卷3期 Journa安lof徽An师hu范iNo大rm学alU学ni报vers(it自y然(N科at学ura版lS)cience) V0l1．33No．3 2010年5月 May．2010 脂质体 电化学发光免疫传感器用于人 lgG的检测 李 玲， 王海燕， 孙东艳， 龚 武， 王 伦 (安徽师范大学 化学与材料科学学院，安徽省生物传感省级重点实验室，安徽芜湖 241000) 摘 要：实验构建了一种检测人免疫球蛋白G(人 IgG)的竞争型免疫传感器．采用层层组装的方法 将 IgG抗体固定在金纳米粒子修饰的金电极表面，基于待测 IgG与 IgG抗原标记的、内部包裹Ru (bpy)2 的脂质体之间的竞争，实现对人 IgG的检测．结果表明，电化学发光强度与人 IgG的浓度 在0．1—3ng／mL范围内呈 良好的线性关系，线性回归方程为y=803．1—206．2x(ng／mL)(n=6，R =0．99)，检出限为O．05ng／mL．对人血清中IgG检测，结果令人满意． 关键词：电化学发光；人免疫球蛋 白G；免疫传感器；脂质体 中图分类号：0657．1 文献标识码：A 文章编号：1001—2443(2010)03—0258—04 近年来，电化学发光免疫分析(ECLIA)因具有无放射性、灵敏度高、线性范围宽、操作简便、易标记、可实 现在线活体分析等优点，得到人们的广泛关注，在免疫分析研究中发挥着越来越重要的作用 1【J． 脂质体是一种生物模拟膜，已经在很多领域得到了广泛的应用．它在形成过程中能包裹水及其中的溶质 分子，且其表面还可以连接抗原或抗体等生物大分子．脂质体裂解，释放出的标记物量与抗原抗体的量成正 比，据此，建立了脂质体免疫分析方法．该方法不仅保持了传统免疫分析高度专一性和高效性的优点，且由于 其包封或吸附了大量的信号物质，故能极大地增强响应信号-2J． 金纳米粒子(GNPs)是一种经典的纳米材料，已广泛应用于生物分子的检测 3【-引．CarraleroSanz等 J把 电极放入HAuCh溶液中并施加一定的电位制得了金纳米粒子修饰电极，该类电极具有检测范围宽、灵敏度 高、使用寿命长等优点． 本文采用层层组装的方法将 IgG抗体固定在金纳米粒子修饰的金电极表面，基于待测抗原与抗原标记 的、内部包裹有Ru(bpy)~的脂质体之间对传感器表面有限的抗原结合位点之间的竞争，使结合到传感器 上的脂质体的量随着待测抗原浓度的增加而减少，再以TritonX一100破乳，释放出Ru(bpy)；进行直接电 化学发光检测，实现了对人 IgG的竞争免疫检测．对人血清中IgG的含量进行了检测，结果令人满意．这种 免疫传感器灵敏度高，检出限低，稳定性好，可望应用于医学诊疗分析． 1 实验部分 1．1 仪器和试剂 仪器：旋转蒸发器RE一5220D(上海长城仪表厂)；循环水式多用真空泵SHB一ⅢA(河南省太康耗材仪 器厂)；CHI760电化学工作站(上海辰华仪器公司)；IFFM—E型流动注射化学发光分析仪(西安瑞迈分析仪 器有限公司)；三电极体系：金电极 (直径2mm)为工作电极，Ag／AgC1为参比电极，铂丝为对电极． 试剂：Ru(bpy)3C12·6H20(Aldrich)；聚乙烯亚胺(PEI)(Aladdin)；牛血清 白蛋白(BSA)(长沙欧迈生物科 技有限公司)；戊二醛，人免疫球蛋白G(人 IgG)，羊抗人 IgG，大豆卵磷脂，胆固醇(合肥博美生物科技有限责 任公司)；脑磷脂(美国sigma公司)；HAuCh(上海化学试剂有限公司)；甘氨酸(中国医药(集团)上海化学试 剂公司)；透析袋 (北京索莱宝生物科技有限公司)；2一(二丁基氨基)乙醇(2一Di—n—butylaninoethano1) (DBAE)(Tokyokaseikogyo公司)；其它试剂均为分析纯，实验所用水为二次亚沸水． 收稿 日期：2010-01—23 基金项 目：国家自然科学基金． 作者简介：李玲 (1986一)，女，安徽阜阳人，硕士研究生；通讯作者：王海燕 (1974一)，女，江苏泰兴人，教授，博士；王伦 (1956一)，男，安徽合肥 人，教授，博导． 33卷第3期 李 玲，王海燕，孙东艳，等：脂质体电化学发光免疫传感器用于人