表达人NEP基因重组腺病毒载体的构建及其降Aβ作用的研究.pdfVIP

第 47卷 第 10期 山 东 大 学 学 报 (医 学 版) 2OO9年 10月 V01．47 No．10 JOURNALOFSHANDONGUNIVERSITY(HEaLTHSCIENCES) 0ct．20o9 文章编号：1671—7554(2009)10—0023—05 表达人 NEP基 因重组腺病毒载体的 构建及其降A』3作用的研究 张静，段珊，杨玲玲，崔行 (山东大学医学院生物化学与分子生物学研究所 ，济南 250012) 摘要：目的 构建携带人全长NEP基因的重组腺病毒载体 ，包装扩增获得高滴度病毒 ，检测其对损伤细胞的降 淀粉样肽(At3)作用。方法 构建含NEP基因的腺病毒穿梭载体pAdTrack—nep，并与骨架载体pAdEasy-1在细茵内重 组为pAd-NEP，经293细胞包装为增殖缺陷I陛腺病毒，感染人神经母细胞瘤SK-N—SH细胞。采用RT-PCR和Western blot法分析检测NEP的表达水平及感染内源性损伤的SK-N-SH细胞(sweAPP-SK)，采用Elisa法初步检测NEP对邯 的降解程度。结果 成功构建重组腺病毒AD—NEP和对照病毒AD—GFP，且重组腺病毒能感染人神经母细胞瘤SK- N—SH细胞并检测到 目的基因的高表达。Elisa结果显示，NEP高表达有明显减轻 在细胞外累积的作用。结论 利用细菌内质粒同源重组法可快速简捷地制备表达外源基因的腺病毒，感染AD—NEP的神经细胞通过NEP高表达 可以明显减轻 累积。 关键词 ：内肽酶类；腺病毒，人 ；淀粉样 8蛋白；阿尔茨海默病 中图分类号：Q78；R741．02 文献标志码 ：A Constructionofrecombinantadenoviursvectorexpressingneprilysinand effectonreducingtheAl3Sdepositionofrecombinantadenoviurs ZHANGJing，DUANShan，YANGLing—ling，CUIXing (DepartmentofBiochemistryandMolecularBiology，SchoolofMedicineShandongUniversity，Jinan250012，China) Abstract：Objective Toconstructtherecombinantadenovirusvectorcarryingthehumangeneneprilysin(NEt)，obtainahig【h titervirusbypackingandincreasing，nadexplorehtereducing of邶 Sdepositiontothedamagedcells．Methods A shuttle plasmidpAdeasy-1wasconstructedinbacteriaandoAd-NF~ Was generatde ．Thereplication-deficientadenovimswaspackednad propagatde inthecell293．Th enhtepersonSnervemetrocytelumpcellSK-N—SH cellswereinfectedandNEPexpressionwag examinedbyRT-PCR andWesternblot．TheendogenousdamagedSK-N—SH cellswereinfectednadhtedegenerationto觚 Was examined．Results Ad—NEPandcontroladenovimsAd-GFPweresuccessfidlyconstructed．TherecombinantadenovirusCna el- fieientlyinfecthtepersonSnerve