基于液滴微流控芯片的单细胞分离.pdfVIP

簧34毒第3期 湖北大学学报( 自然科学版) 。，1．3_ o ．3 丝坚墅塑1———————垫竺!呈!望些些些些鬯型坠型 V塾：型N! 文章编号：1000—2375( 2012) 03—0282—0 ／i 基 于 液 滴 微 流 控 芯 片 的 单 细 胞 分 离 洪龙烨，郭峰，国世上，赵兴中 ( 武汉大学物理科学与技术学院，人丁=微结构教育部重点实验室，湖北武汉430072) 摘要开发基于静 电场力和集成微电极 的微液滴操控技术 以实现单细胞的分离 ．结合微流控技术 的发 展 ，设计并制作 了以有机聚合物PI ) MS( p 。l y di met hyI si l ox ne ) 为材料 的具有流聚焦结构的芯片，利用流聚焦 结构的芯片，通过改变分散相和连续相的流速，制备包 裹着悬浮痛细胞( HCTl l 6) 的海藻酸钠凝胶溶液微液 滴，并对其包裹细胞数目进行统计分析，其 中包裹单细胞的微液滴少于总液滴数的1( ) ％．受到液滴自带 电现 象的启发．通过集成微电檄到微流控芯片r h利用 电压脉冲产：牛静 电场力，实现r 单颗单细胞微液滴的电分离 和富集． 关键词微流控；微液滴；单细胞；分离 中图分类号( )B58 文献标志码A 微流控j 卷片( 又称微全分析系统或芯片实验室) ，现在已经广泛用于化学合成、生物化学分析、药物 筛选、DNA测序等领域．微流控系统能够将几乎整个化学室的功能，包括采样、稀释、进样、反应、分离和 检测等集成在可重复使用的微芯片上，具有高通量、高灵敏度、低试剂量消耗、无交叉污染、反应速度快 和易于集成化等诸多优点。1。．生物系统是非常复杂的，即使是同类的细胞彼此之间也是r 差万别的．针 对单个细胞的差异性的分析试验中，单细胞操控将是关键问题 ．高效的单细胞操控技术往往成本 比较昂 贵，在常规实验中难 以实现．比如，临床肿瘤样本总是细胞总量少，但又极具研究价值．所 以如何将其收 集并进行有效的单细胞的分析是一个很有科学价值和挑战性的课题p 引． F{前流式细胞仪( f l ow cyt omet r y) 已经被广泛地应用于细胞分离和检测，其可 以对104 以上数量的 细胞进行有效的操作．但是流式细胞仪昂贵，体积庞大，需要专 门技术人员操作．很难在医院和实验室进 行广泛的应用．微流控芯片具成本低廉、体积微小、操作简单、样品消耗少等特点，可以更好地适合 102 ～105细胞的操作和分离_l ，可以非常好地克服上述局限，并可以实现类似仪器的小型化、集成化、便携 带化和 自动化．微流控芯片尺寸在微米级和细胞大小相当，非常适合用于细胞的物理操控以及相关生化 反应操作 ‘‘一．以微流控芯片为平 台的细胞分离技术主要有两类：一是根据采集到信号( 荧光、散射光或者 阻抗) 的有无或者强弱为判断标准施加外部操控措施进行筛选；二是按照细胞本身特定 的物理化学特性 ( 大小 、介电常数) 在不 同电场驱动作用下进行筛选 ．美国加州理T大学的学者开发了一种基于荧光诱发 细胞分选的微流控芯片，他们首先对待分选的细胞进行荧光标记 ，然后利用多层PDMS制作 的微 阀对 以激光激发 出的荧光信号的有无和强弱为检测信号来控制细胞流向，成功地实现 了对表达和没有表达 绿色荧光蛋白的大肠杆菌进行分选．光镊分选也可以用于激光诱导荧光激发细胞的分选．在这种细胞分 选过程中，包在鞘流 巾的单个细胞在488 nm激光束的照射下，通过绿色荧光蛋白表达发出荧光，经光电 倍增管转换为电信号进入计算机处理，当光强达到计算机所设范围时，近红外激光肩动光镊作用 ，细胞 流动方向发生偏转，目标细胞流 向收集通道，非绿色荧光蛋白表达的细胞则未受到光镊的作崩而流向废 液通道L6j ．Gw r ds 等设计了一种用PDMS和玻璃芯片制作 的集成化细胞分选芯片，通过检测不同细胞 阻抗值的变化来实现分选[ 7j ，在玻璃芯片内利用高分子化合物作为盐桥，当细胞通过盐桥时，引起阻抗 收稿 日期：20 12 04一 ¨ 基金项 目：国家i q然科学基金重点项 目(5 113200 1) 资助 作者简介：洪龙烨( 19 88一) ，男，硕士 生；国世上，通信作者，副教授，E m i l ：gss yhx @wh