Al（OH）3和CpG ODN免疫佐剂对丙型肝炎病毒多表位抗原PCX3疫苗免疫效果的影响.pdf

第 48卷 第 5期 复 旦 学 报 (自然科学版) Vo1．48No．5 2009年 10月 JournalofFudanUniversity(Natura1Science) 0ct．2009 文童编号 ：0,1277104(2009)050661—07 AI(OH)3和 CpGODN免疫佐剂对丙型肝炎病毒 多表位抗原PCX3疫苗免疫效果的影响 祁淑红 ，杨桂梅 ，谢 匡成 ，刘龙丁。，任大明 (1．复旦大学 生命科学学院遗传学研究所，遗传工程国家重点实验室，上海 200433；2．上海交通大学 附属第一人民医院，上海 200080；3．中国医学科学院 医学生物学研究所，昆明650118) 摘 要：以HCV蛋 白疫苗PCX3为抗原，分别加入AI(OH)。佐剂，CpC-ODN佐剂，以及两种佐剂联合作用的 复合佐剂。对雄性六周龄BAIB／／c小鼠进行常规免疫．与其他免疫组相比，A1(0H)。和CpGODN复合佐剂与 PCX3抗原联合作用组产生的特异性IgG(1×10)和IgM(1×10)抗体滴度最高、持续时间最长；自然杀伤效应 (cTI)实验显示该组小鼠诱发的CTL杀伤效应 (40．9l )显著高于其他免疫组(Po．05)；流式细胞仪对小鼠 淋巴细胞亚群进行分型分析发现：从第 2周开始，该组小鼠体内CD4 ／CD8一细胞比值 (3．26)显著高于PCX3 抗原单独作用组 (PO．05)．结果表明，Al(OH)。和CpGODN复合佐剂可以从体液免疫和细胞免疫两方面对 HCV蛋 白疫苗PCX3的免疫效果进行增强．并且具有协同效应． 关键词：HCV；HCV蛋 白疫苗；Al(OH)3；CpGODN；体液免疫；细胞免疫 中图分类号：R512 文献标志码 ：A 丙型肝炎病毒(HCV)是单股正链 RNA病毒，主要经过血液传播．目前全球 HCV感染者约有 2亿 (占世界人 口总数的3Vo) ，每年新增的感染者达到 300～4OO万 ，我 国目前 HCV感染者近 4000万．超 过 70 的HCV感染者可发展为慢性感染，而慢性 HCV感染与肝硬化和肝癌直接相关I2]．而以干扰素和 利巴韦林为主的抗病毒治疗只能使 15 ～2O 的患者康复，并且其价格昂贵，无法普及I3]．因此对 HCV 的预防和治疗现在成为全世界关注的重点． 针对 HCV 的高度变异性，本实验室在 HCV基因表达产物中选择了5个来 自核心蛋白C(1～16aa， 1324141aa)、E1(126～135aa)、NS3(139～147aa)及 NS5(768 775aa)且具有 良好免疫原性的高度保 守表位，将该段基因串联重复构建成多表位抗原基因PCX3，其表达产物不仅能被上海、北京、广州及美国 等来源的HCV患者血清特异识别，还可以在小鼠体内诱发较高水平的IgG抗体以及较高水平的特异性 CTI效应 。、．PCX3诱导的鼠抗血清在体外能够结合HCV阳性血清中的绝大部分HCV病毒粒子，该高 滴度抗血清能够使 40 移植了人肝细胞(SCID／A “PA)的转基因小 鼠(用 HCV 阳性血清经腹膜注射 感染后两周)的病毒滴度显著减少，并且保护 60％的小鼠避免 HCV感染l5]． 佐剂是一种免疫增强剂，本身不具免疫原性，常与抗原物质一起注射或预先注入机体后，影响机体免 疫调节网络，使机体更早、更有效、更持久地产生免疫应答[6]． 为了探索加强PCX3蛋白疫苗的免疫效果的方法，本文选取了Al(OH)。(主要诱导体液免疫应答)和 CpGODN(人工合成的含 CpG基序 的寡核苷酸，主要诱导细胞免疫)以观察它们的单独或联合使用对 HCVPCX3蛋白疫苗免疫效果的影响． 1 材料与方法 1．1 菌株和质粒 大肠杆菌E．coliBL21(DE3)．表达载体 pET-28b(+)和带有丙型肝炎病毒多表位抗原的质粒 pET一 收稿 日期 ：2009—03—22 基金项 目：围家高技术研究发展计划 目标导向课题资助项 目(2006AAD2A228) 作者简介：祁淑红(1984一)．女，硕士研究生；通讯联系人：任大明，男，教授，E-mail：dmren@fudan．edu．CIL 662 复 旦 学