淀粉酶活性测定方法的改善.pdfVIP

植物生理学通讯 第41卷 第5期，2005年10月 655 淀粉酶活性测定方法的改进 1,2 1 2,* 李雯 邵远志 陈维信 1 2 海南大学生命科学与农学院，海口570228； 华南农业大学园艺学院，广州510642 Improved Method for Determining Amylase Activity 1,2 1 2,* LI Wen , SHAO Yuan-Zhi , CHEN Wei-Xin 1 College of L if e Science and A gricu lture, Hainan University, Haikou 5 70228, China; 2 College of Horticu lture, Sou th Ch ina Agricultural University, Guangzhou 510642, China 提要 以香蕉果实为试材，对常规的淀粉酶活性的测定方法进行了改进，取得了更好的效果。 关键词 淀粉酶活性；测定方法；改进 淀粉酶是反映淀粉分解速度、研究糖代谢规 剂为国产分析纯试剂。 律的一个重要指标之一。香蕉是典型的贮藏淀粉 2.2测定方法 的果实，果实采后其淀粉转化为可溶性糖。了解 2.2.1酶液的提取 将每一个重复的3个果实去皮 淀粉酶活性的变化规律对研究香蕉果实采后生理及 后切碎混匀，称取其果肉1 g，置于预冷的研钵 -1 贮藏保鲜十分重要。测定淀粉酶活性常采用的是 中，加2 mL预冷的0.1 mol·L 柠檬酸溶液(pH [1] 酶动力学方法中的化学法 。果实淀粉酶活性的 5.6)和少量石英砂研磨，将匀浆移入7 mL的离心 -1 测定一般是借鉴文献2~4的方法，但这些方法在 管中，再分别用1 mL的0.1 mol·L柠檬酸缓冲液 测定香蕉果实淀粉酶活性时，操作繁琐，重复性 (pH 5.6)冲洗2次,于4℃下以15 000×g离心15 较差。本文就酶液的提取、反应步骤的取舍等方 min，上清液转移入另一个5 mL离心管中，作为 面对这些方法作了改进，取得了较好的效果。 酶提取液备用。 2.2.2酶活性的测定 取洁净的试管18支，作好 材料与方法 标记，每一个样品设1个对照。总反应体积为0.5 1材料 mL，测定管含0.2 mL的酶提取液和0.3 mL的1% 实验在华南农业大学的广东省果蔬保鲜重点 淀粉溶液；对照管含0.2 mL的酶提取液和0.3 mL -1 的0.1 mol·L 柠檬酸溶液(pH 5.6,不含底物淀粉)。 实验室进行。材料为巴西香蕉果实(Musaspp. AAA Group, Cavendish)，购自水果市场。试材选3种 将试管放入恒温40℃的水浴锅中，保温30 min后 成熟度差异非常明显的果实进行测定：(1)绿熟硬 取出，立即加入1.5 mL的DNS试剂终止反应。 果，(2)中等黄熟微软果，(3)黄熟极软果。所选果 再将试管置于沸水浴中10 min，取出后冰浴冷 实大小一致、无病虫害、无机械伤，每类果实 却。取反应液稀释10倍，测定波长520 nm处的 9个果，重复3次。