Exosomes致敏的树突状细胞介导的抗大肠癌LoVo细胞株的作用.pdfVIP

柳州 医学 2010年第 23卷第 4期 · 125 · Exosomes致敏的树突状细胞介导的 抗大肠癌 LoVo细胞株的作用 黄世锋，韦晓谋，戴盛明，杨春旭 (广西柳州市工人医院普外科 545005) 【摘 要】目的 分离LoVo细胞释放的exosomes，以其致敏树突状细胞 (dendriticcell，DCs)，观察 其对细胞毒性T淋 巴细胞 (cytotoxicTlymphocytes，CTLs)的激活效应。方法 离心超滤和蔗糖密度梯 度离心法分离LoVo细胞释放的exosomes，常规方法从静脉血单个核细胞诱导DC，并分离T细胞，将L0一 Vo细胞来源的exosomes冲击或未冲击的DCs与T细胞共培养。MTT比色法检测体外细胞毒活性。结 果 LoVo细胞分泌的exosome致敏的静脉血 DCs激活CTL的能力显著高于肿瘤冻融抗原致敏的DCs 组，在效靶比为50：1时，两组CTLs对LoV0细胞的杀伤率为(67．9％VS38．7％ ，P0．05)。结论 树 突状细胞经来 自LoVo细胞分泌的exosomes致敏后，能活化 CTLs而杀伤肿瘤细胞。 【关键词】Exosome；树突细胞；Vo细胞 【中图分类号】R371．22 【文献标识码】A 研究表明，肿瘤细胞分泌的exosome更具有免 用蔗糖密度梯度离心法，以30g／L蔗糖／重水为密 疫治疗效果，是新型的瘤苗。本研究探讨其生物 度垫，100000rmin超速离心50min，收集底部的 学特性、免疫学功能及肿瘤免疫活性的同时，又以 缓冲垫，PBS稀释，相对分子质量为 100000MW— exosomes作为抗原来致敏DC细胞，活化T细胞的 COMilliporeAmicon离心这超滤，获得 exosomes。 功能，可直接激活T细胞，诱发针对肿瘤的特异性 过滤分装 ，一80clc保存备用。 免疫应答，为研制具有临床应用前景的高效非细 1．2．2肿瘤冻融抗原制备 体外培养的L0v0细 胞性肿瘤疫苗提供新的思路。 胞，调整细胞浓度为 1×10／ml，反复快速冻融4 1材料与方法 次后，5000r／min离心30min，取上清过滤分装 1．1材料 大肠癌细胞株 LoVo具有肠癌细胞 备用 。 CEA阳性的特点，为本院生物研究所提供。RPMI 1．2．3去除T细胞的静脉血单个核细胞 (mononu— 1640培养基购 自GIBCO公司，重水(D20)、四甲 clearcells，MNCs)和T细胞分离 抽取健康 自愿 基偶氮唑蓝(MTT)购 自Sigma公司，rhGM—CSF、 者静脉血，Ficol1分离得到MNCs，Tris2NH4C1裂 rhlL一4和TNF—a购 自Sigma公司。细胞表型分 解红细胞 ，静置 2h轻吸未黏附的细胞悬液，采用 析所用单克隆抗体Cdla、HLA—DR、GD83、CD86 尼龙毛柱滤过法得到分离纯化的T细胞。在含 l0 均购 自Pharmingen公司。 ％的胎牛血清、100IU／ml链霉素、100IU／ml青霉 1．2方法 素、5×10 mol／L2琉基 乙醇和 1X10 mol／L2 1．2．1分离 exosomes 常规培养LoVo细胞，培养 谷氨酰胺的RPMI1640培养基中培养。 液经低速离心去除细胞及碎片，收集上清液，MW- 1．2．4静脉血 DCs的体外培养 取去除T细胞的 COCentriplus离心超滤管浓缩超滤，取浓缩液，采 静脉血MNCs，留取部分作为对照组用流式细胞 仪检测分化前细胞表型，其余加培养液调整细胞