HepaRG细胞的生物学特点及其应用.pdfVIP

· 38(、 · · 综 述 · HepaRG细胞的生物学特点及其应用 蒋黎 王 宇明 肝脏不仅是外源化合物吸收 、消化 、代谢 的场所 ，也是体 内 未分化 的狭长 HepaRG细胞能表达肝祖细胞的标志 ，而分化 的 一 些必需物质 的吸收 、贮存 、代谢 的器 官。由于外源性化合物 两种类型细胞能分别表达肝细胞和胆管细胞 的生物学标志 ，其 体内代谢过程 中可致肝脏损伤 ，因此肝脏也是毒理学研究的主 中，肝样细胞 占5() ～55 的增殖水平l4。这种从 同一祖细 要器官之 一。 胞向肝细胞样和胆管样两种细胞类型分化的特性及其罕见 ，与 因遗传 、环境及病理生理 的不 同，外源性化合物在不 同种 既往报道 的肝瘤细胞株大不相 同，和 25年前用肝细胞和未分 属和同一种属 的不 同个体间的代谢存在差异，故 以动物试验来 化胆管细胞共培养所建立的细胞模型有些相似 ，且能更长更好 验证药物 的肝毒性有时会出现与人体内迥异的状况 ，需寻找适 的保持肝细胞 的肝特异性功能特性 。然而 ，当分化 的肝样细胞 合于体外肝毒性研究的体外肝细胞模型。为模拟人{奉内的肝 高密度按种时(0．45×10。个细胞 ／cm )，他们 的增殖活性反而 脏 的代谢途径和毒性机制 ，常采用人原代肝细胞 ，凶其在一定 有限，但能保持肝样细胞特 点。 条件下(数 日时间内)还具有体内肝细胞的一些功能及活性，特 当 HepaRG细胞从祖细胞开始活跃增殖时 ，白蛋 白及触珠 别是还保 留有药物代谢 中的 I相药酶 (CYP)活性 ，具有研究价 蛋 白(haptoglobin)mRNA表达极其低下，随着细胞融合分化 值[。而人胎肝细胞只能表达微最的 CYP1A1和CYP3A7 。 后逐渐增加 。当高分化为肝样细胞后 ，成熟肝细胞的标志—— 此外 ，来 源于人 的肝肿 瘤细胞 株 ，如 HepG2，具有肝 细胞 的一 醛缩酶 B(aldolaseIj)mRNA 的水平 ，达到新鲜分离 的人肝细 些基本功能，如含有 CYP45O的一些酶 (如 CYP2E1、1A1等)． 胞 2() 的水平 。相 比 HepaG2细胞 ，其 白蛋 白和触珠蛋 白 也可用于 CYP诱导 、基 因的表达及药物代谢机理 的研 究。然 mRNA 的表达水平 比HepaRG细胞低 ，检测不到醛缩酶 B的 而 ，人原代肝细胞来源稀少 ，生命周期和生长活性有限，即使改 转录。 进培养方法 ，采用 “三明治夹心”培养法 ，都会随培养时间增加 ， 二、药物代谢相关酶系 难 以维持和体 内一致 的CYP酶系，使肝细胞对受试物 的反应 细胞色素 P450(cYP)是最大的药物代谢酶蛋 白超家族之 能力迅速下降。此外，人肝细胞虽可长期冻存 ，但冻存复苏后 一 ，其 中参与人体肝药物代谢 的主要有 CYP1、CYP2、CYP3及 的肝标志性的生物学活性会受到影 响。HepaG2缺乏肝标志 CYP4家族 。P450酶的一个重要特点是 易受多种 内外源性物 性的生物学活性 ，CYP相关酶系诱导表达量少 ，即使采取质粒 质的诱导或抑制，导致酶数量和活性改变 ，从而改变药代动力 转染 CYP酶或肝特异性转录因子 的方式 ，转染 的细胞株也不 学，使药物活性物质累积导致毒性增强或降低其血药浓度和治 适合研究正常肝细胞的基 因表达调控 。 疗效果 。因此 ，诱导或抑制 P450酶能 引起个体与个体之间或 尽管原代人肝细胞在运用 中受限颇多 ，但它仍然是体外研 个体本身对药物代谢 的差异，在临床研究中如何提高药物疗效 究化合物代谢和药物毒性的细胞模型的金标准 。新近获得 的 和降低毒副反应颇为重要。 人肝细胞株 HepaRG