人核迁移蛋白C在毕赤酵母中的融合表达.pdfVIP

甘肃医药2010年第29卷第5期 GansuMedicalJoumal，Oct2010，Vo1．29，No．5 · 481． · 博士后研究 · 人核迁移蛋白C在毕赤酵母中的融合表达 陈伟民 王飞 【摘要】 目的：研究获得人体核迁移蛋白C在毕赤酵母中的高效表达的方法。方法：将重组表达质粒pPICZctA—hNUDC—his用 BxtXI单酶切，电击转入PichiapastorisKM71，采用Zeocin筛选获得转化子。结果：通过优化诱导表达条件使 目的蛋白获得较高的 表达量。结论：通过优化诱导蛋白表达条件可大幅提高易降解蛋白hNUDC在毕赤酵母 KM71中的表达量。 【关键词】 人体核迁移蛋白c；酵母 KM71；融合表达 中图分类号：Q789 文献标识码：A 文章编号：1004—2725(2010)05—0481—04 Fusionexpressionofhuman nucleartransferproteinC inthepichia CHEN Wei—rain WANG Fei 1．GeneticsResearch．Guangzhou Research Institute ofSports Science，Guangzhou 510650，China；2．Key Laboratory ofAquatic Economic Animals for Breeding and ReproductioninGuangdongProvince，Guangzhou510275China 【Abstract】0bjective：ToexploreamethodofrefficientexpressionofobtaininghumannucleartransferproteinCinthepichia． Methods：RecombinantexpressionplasmidpPICZctA—hNUDC-hiswasrestrictedbysingleenzymeBxtX I，wasshiftedPichiapastofis KM71byelectricshockandobtaniedtrlansf0．肿 antsbyadoptingZeocinscreen．Results：Therewashigherexpressionofpurposeproteinby optimizing induced expression conditions．Conclusion：Higher expression of easily degradable protein hNUDC can be enhanced substantiallyin PichiapastorisKM71by optimiznig inducedexpression conditions． 【Keywords】humannucleartrnasferproteinC；PichiapastofisKM71；fusionexpression 核迁移蛋 白C (nucleardistributionproteinC， 培养基均按美国Invitrogen公司毕赤氏酵母 manual配 NUDC)在核迁移中具有重要作用，其在不同细胞类型 制；YNB、Peptone和酵母粉为 DIFCO公司产品；Zeocin 中广泛存在并首先在Aspergillus．nidulans中作为调控 抗生素、YNB、生物素、山梨醇购 自Invitrogen公司，胶 核迁移的nud基因得到鉴定 1_【2】。NUDC与血小板生成 回收试剂盒、质粒提取试剂盒购 自OMEGA公司，蛋白 素 (TP0)受体 Mpl有较强结合能力 ，可促进小鼠的血 纯化亲和树脂购 自MERK公司。Westen—Blot试剂盒购 小板生成并促进体外巨核细胞的增殖和分化。hNUDC 自KPL公司。各种限制性内切酶、修饰酶、连接酶均购 促进多倍体巨核细胞和前血小板的生成 MAPK信号 自Takara公司。 通路并通过Mpl起作用 。为研究 hNUDC的功能，本 2 方法 实验用毕赤酵母表达系统来体外表达获得hNUDC蛋白。