甾醇 、甾烷 醇柱前衍生高效 液相荧光 分析.pdfVIP

维普资讯 第34卷 分析化学 (FENXIHUAXUE) 研究简报 特 川 2006年 9月 ChineseJournalofAnalyticalChemistry S131～S134 ；研 究简报 ； ：，…．…．．…．．…．．…．．…．．…．．…．i 甾醇、甾烷醇柱前衍生高效液相荧光分析 谢敏浩 。 裘爱泳 何拥军 吴 军 周杏琴 邹 霈。 刘娅灵 罗世能 (江南大学食品学院，无锡214036) (江苏省原子医学研究所 ，兄锡 214063) 摘 要 采用荧光衍生化试剂2-(9一咔唑)乙酰氯，对天然产物谷甾醇、豆甾醇、菜油甾醇及谷甾烷醇的柱前 衍生化条件，包括催化剂的种类、反应温度、衍生化时间等进行了考察，结果表明：催化剂选用i乙胺，反应温 度80~C，时间20mirl，衍生产物具有恒定的最大检测响应值。利用高效液相色谮对衍生产物进行分析，并对 衍生物的分离进行了优化选择 ，达到 j-较好的基线分离，检出限为 12．6—29．5nmol／L。方法应用于血清样品 的测定，谷 甾醇、豆 甾醇、荣油甾醇和谷甾烷醇的标准加入 收率分别为 101．9％、102．4％、101．O％和 103．2％ 关键词 2一(9-咔畔)己酰氯 ，高效液相色谱 ，柱前衍生 ，甾醇，甾烷醇 1 引 言 甾醇(即固醇)，主要包括谷甾醇、豆甾醇、菜油甾醇等，它们是一类在 自然界大量存在的天然化合 物…，但谷甾烷醇在 自然界中仅少量存在，主要来源于化学合成 』。甾醇、甾烷醇能有效降低血浆胆 同醇浓度和降低冠心病的发生牢，其临床应用前景十分广阔 』，已广泛应用于食品、药品、保健品及化 妆品等行业 5J。目前用于甾醇、甾烷醇类化合物分析的方法主要有薄层色谱法 、可见光比色法 、气相色 谱法_6和紫外检测高效液相色谱法 等，这些方法灵敏度较低，无法进行痕量测定。咔唑类衍生化试 剂由于其分子中含有孤 电子对的N原子，能发出较强的荧光，正Et益受到重视_8j，2．(9-咔唑)乙酰氯 主要用于伯胺、氨基酸等物质的衍生化 ¨，具有较高的检测灵敏度，其用于伯醇、仲醇的衍生化未 报 道。本实验利用所合成的2一(9一咔唑)乙酰氯，进行柱前衍生荧光检测甾醇、甾烷醇等仲醇化合物，不仅 操作简便、衍生时间短，而且灵敏度高。谷甾醇、豆}；{醇、菜油甾醇检测灵敏度分别是紫外检测高效液相 色谱的31、4O和33倍，并克服了符甾烷醇分子中无发色基团，紫外无法检测的不足，谷甾烷醇检出限则 为23．2nmol／L。 2 实验部分 2．1 仪器和试剂 600型高效液相色谱仪 、2475Multi入荧光检测器、2487紫外检测器和Empower色谱数据处理_丁作 站均为美国Waters公司产品。 谷甾醇、谷 甾烷醇 (Sigma公司)；豆 }；{醇、菜油甾醇 (Aldrich公司)；2一(9一咔唑)乙酰氯 (自制 备)… ；三乙胺 、苯、甲醇、正己烷等试、剂均为分析纯。 2．2 样品制备 2．2．1 衍生化试剂2．(9一咔唑)乙酰氯的配制 准确称取一定量的2一(9一咔唑)乙酰氯于十分十燥的容 量瓶中，加无水苯(经无水氯化钙干燥处理)配制成4．0mmoL／L的溶液，密封后低温保存备用。 2．2．2 标准甾醇、甾烷醇类化合物的配制 准确称取一定量的谷甾醇 、豆}；{醇、菜油甾醇 、谷甾烷醇，用 无水苯配制成2．0mmoL／L的储备液。相应的低浓度 l作液由苯进一步稀释而成 2005-09-05收稿 ；2005．12．22接受 本文系国家863计划项 目资助 (NO．2001AA248011) 维普资讯 l32 第34卷 2．3 衍生化反应 取 100 I样品于 1mL的安焙瓶中，加入 乙胺5 L，无水苯500 1，超声混合均匀后，分批