1株氯苯降解菌的分离鉴定及降解特性研究.pdfVIP

笫35卷第 4期 辽宁师范大学学报 (自然科学版) VO1．35 No．4 2012年 12月 JournalofLiaoningNormalUniversity (NaturalScienceEdition) Dec． 2O12 文章编号 ：1000—1735(2012)04—0538—06 1株氯苯降解菌的分离鉴定及降解特性研究 谢鲲鹏 ， 谢 明杰 ， 宁淑香 ， 王海涛 ， 李银霞 ， 周集体 (1．辽宁师范大学 生命科学学院，辽宁 大连 116081；2．大连理工大学 环境与生命学院，辽宁 大连 116024) 摘 要：从大连化工厂的活性污泥样品中分离得到 1株氯苯降解茵CB-2，该菌株能够 以 氯苯为唯一碳源进行生长．通过对其形态、生理生化特征分析 以及对 16SrDNA 序列进 行 同源 比较 ，初步鉴定该菌株为肠杆菌属 (Enterobacter)．研究了菌株 CB-2对氯苯的降 解特性，实验结果表明，该菌株对氯苯 的最适 降解条件为pH=7，温度 35℃，摇床转速 为 120r／min，接种量5％．在最适条件下，氯苯降解率可达82％以上．测定 了降解途径中 相关酶的活性，表 明菌株 CB一2降解氯苯是通过邻苯二酚 1，2一双加氧酶催化的邻位开环 途径进行的． 关键词 ：氯苯；生物降解；肠杆茵 中图分类号 ：X172 文献标识码 ：A 氯苯作为一种重要的化工原料 ，广泛存在于有机合成、医药 、农药、溶剂 、染料等生产废水 中，给水 体造成了不同程度的污染．氯苯作为一种典型的氯代化合物 ，其化学性质 比较稳定，与其他的非氯代化 合物相 比，由于其更高的持久性和更强的毒性 ，因此对环境的危害十分严重． 利用微生物来降解氯苯及氯苯类化合物在国内外已有很多报道，并筛选出大量对氯苯有很好降解 作用的微生物[1]．这些微生物主要包括假单胞菌、黄杆菌、芽孢杆菌等．而这些菌株虽然能够 降解氯 苯，但所需时间较长，降解率较低 ，不能够对氯苯进行快速高效的处理 ]．因此分离高效、多样的微生 物菌株成为我们工作的重点． 本实验室从大连化工厂的活性污泥样品中分离出 1株氯苯降解菌 CB-2，该菌株在有氧和无氧 的 条件下 ，都能以氯苯为唯一碳源进行生长，菌株 CB-2在 24h内可使 100mg／L的氯苯降解率达 8O 以上．笔者对该菌株进行 了形态学、生理生化鉴定和 16SrDNA的序列分析 ，经鉴定该菌株属于肠杆菌 属 (Enterobacter)．利用肠杆菌对氯苯进行微生物降解在国内外还鲜有报道．本文对其在好氧条件下对 氯苯的降解特性进行了研究． 1 材料和方法 1．1 样品来源及降解菌的分离与纯化 分离样品来 自大连化工厂的活性污泥．采用逐步提高氯苯浓度的方法进行驯化培养．具体 的操作 方法：取活性污泥样 品 1OmL，接种于 100mL富集培养基 (氯苯初始浓度为 60mg／L)中，3O℃， 120r／min~床振荡培养 5d．取出 10mL菌液接种到新鲜富集培养基中(氯苯浓度为 80mg／L)．重复 上述步骤 ，以20mg／L为梯度 ，逐步提高富集培养基中氯苯 的浓度 ，直到氯苯浓度为 160mg／L为止． 收稿 日期 ：2012—05—11 作者简介 ：谢鲲鹏(1976一)，男，辽宁大连人 ，辽宁师范大学讲师，大连理工大学博士研究生 ． 第 4期 谢鲲鹏等 ： 1株氯苯 降解茵的分离鉴定及 降解特性研 究 539 在含氯苯浓度为 160mg／L的无机盐固体培养基上 ，采用稀释涂布平板法进行分离． 1．2 培养基 1．2．1 无机盐培养基L7] NH4NO31．0g，KH2PO40．5g，K2HPO 0．5g，MgSO4·7H2O0．2g， NaC10．2g，CaC120．1g，FeC1210 溶液 1滴 ，MnSO4 ·H2O 痕量，pH 7．2～7．5，蒸馏水 1000mL， 121℃灭菌 20min． 1．2．2 富集培养基 蛋白胨 10g，酵母膏 5g，NaC110g，pH7．O～7．2，蒸馏水 1000mL，121℃灭菌 20m