预防SARS中药方对小鼠细胞免疫功能的影响.docVIP

08014 基于抗体芯片技术的黄芪、板蓝根免疫调节机理初探 摘要 目的：研究黄芪和板蓝根对内毒素诱导的人单核/巨噬细胞（THP-1）中多种炎症因子表达的影响。方法：采用体外培养的检测关键词人人人表达1.1 药品与试剂 黄芪 (自制)，板蓝根(自制)，黄芪和板蓝根药材分别经水回流提取，浓缩，80%乙醇沉淀，制得棕褐色粉末； RPMI 1640培养液、高灭活胎牛血清、青、链霉素均购自美国Gibco公司；苯甲基磺酰氟(PBS) 自配；细胞培养用水为新鲜三蒸水；其它所用试剂均为分析纯。人炎症因子抗体芯片?购自RayBio公司。 1.2 细胞培养 人(Human acute monocytic leukemia cells，THP-1)购自。RPMI 1640培养液（加入 10% 牛血清，100 U双抗，)， 在37 ℃，5% CO2 条件下培养。 1.3 LPS介导实验 分组为：空白对照组(无LPS)、LPS组、LPS+组LPS+板蓝根组。加入LPS组终末质量浓度为g/ml，LPS+组LPS终末浓度为g/ml和 1 mg/ml，LPS+板蓝根组LPS终末浓度为g/ml和 1 mg/ml。调单核细胞密度为×106个，LPS+组LPS+板蓝根组，收集上清液保存待测。 1.在25 °C条件下将芯片膜用ml封闭缓冲液孵化1，移去，用ml洗片试剂Ⅰ在室温下脱色摇床上洗三次，每次5 min。用ml洗片试剂Ⅱ在室温下脱色摇床上洗三次，每次5 min，弃去多余液体。加l上清液于膜的蛋白面，室温孵化1～2 h。倾去样品液，用4 ml洗片试剂Ⅰ在室温下脱色摇床上洗三次，每次5 min。用4 ml洗片试剂Ⅱ在室温下脱色摇床上洗三次，每次5 min。取出膜，装入新孔中，将血管生成抗体用封闭缓冲液稀释至适当浓度加入孔中。室温下孵育2 h后，用ml洗片试剂Ⅰ在室温下脱色摇床上洗三次，每次5 min。用ml洗片试剂Ⅱ在室温下脱色摇床上洗三次，每次5 min。同上方法准备辣根过氧化物酶稀释液并与膜接触，室温下孵育1 h后，用ml洗片试剂Ⅰ在室温下脱色摇床上洗三次，每次5 min。用ml洗片试剂Ⅱ在室温下脱色摇床上洗三次，每次5 min。化学发光，显影，定影将胶片用凝胶图象处理系统分析目净光密度值 1.5 统计学方法 所有数据均以均数±标准差（±s）表示，采用SPSS 13.0统计软件进行统计分析，组间均数比较用t检验，多个样本均数比较用单因素方差分析。 2 结果 2.1 LPS诱导人单核/巨噬细胞炎症因因IL-1β、IL-6和IL-8上调。实验结果见图1。 图1 Detection of cytokines for inflammation in array of Astragalus membranaceus and radix- isatidis 2.2 黄芪抑制LPS诱导的IL-1β、IL-6抗体芯片实验发现1 mg/ml 黄芪+LPS组与相比，表达被显著抑制 (P 0.01)（图）表达，结果表明 IL-6 IL-1β LPS 100±11.2 100±13.4 LPS+黄芪 5.75±1.21 38.6±5.47 图2 Inflammation antibody array analysis of IL-6 and IL-1β expression. **P 0.01 vs LPS group 2.3 板蓝根抑制LPS诱导的IL-1β、IL-6抗体芯片实验发现1 mg/ml 板蓝根+LPS组与相比，表达被显著抑制 (P 0.01)（）表达抑制(P 0.05)（图）表达，结果表明 IL-6 IL-1β LPS 100±12.5 100±15.1 LPS+板蓝根 10.83±2.19 54.8±4.14 图 3 Inflammation antibody array analysis of IL-6 and IL-1β expression. **P 0.01 vs LPS group；*P 0.05 vs LPS group 2.4 黄芪促进单核/巨噬细胞TIMP-2的表达 炎症因子抗体芯片实验发现1 mg/ml 黄芪+LPS组与相比，显著(P 0.01)（图），结果表明±2.65 LPS 11.43±3.10 LPS+黄芪 100±12.6 图4 Inflammation antibody array analysis of TIMP-2 expression. **P 0.01 vs LPS + AMP group 2.5 板蓝根促进单核/巨噬细胞TIMP-2的表达 炎症因子抗体芯片实验发现1 mg/ml 板蓝根+LPS组与相比，(P 0.05)（图），结果表明±5.83 LPS 55.