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花卉组织培养的实践与探究 花卉培育社 指导师 赵沛荣 （本文获温州市第六届普通高中学生研究性学习活动一等奖） ）将采来的植物材料除去不用的部分，将需要的部分仔细洗干净，如用适当的刷子等刷洗。把材料切割成适当大小，即灭菌容器能放人为宜。是对材料的表面浸润灭菌。要在超净台或接种箱内完成，准备好消毒的烧杯、玻璃棒、70%酒精、消毒液、无菌水、手表等。用70%酒精浸10～30秒。由于酒精具有使植物材料表面被浸湿的作用，加之70%酒精穿透力强，也很易杀伤植物细胞，所以浸润时间不能过长主要取用内部的材料，则可只用70%酒精处理稍长的时间。处理完的材料在无菌条件下，待酒精蒸发后再剥除外层，取用内部材料。用灭菌剂处理。表面灭菌剂的种类较多，可根据情况选取1—2种使用见表。用无菌水涮洗，涮洗要每次3min左右，破坏了琼脂的凝固质 组员们正在配置培养基 洋兰科学研究院的工作人员为我们进行操作示范 组员们的亲手实践 洋兰 我们的成果 附件：组员论文及总结展示 探究花卉组织培养基配制失败的原因 对于花卉培育来说，能否成功配制培养基是愈伤组织能否成活的重要条件之一。这个过程并非如他人想象的容易，难是因为每一步都需要小心谨慎，要按书上的操作步骤和要求去做，否则就可能会失败。有几次，配制的培养基没有如我们所愿——凝固，呈现出的是液态或半凝固状态。我们对这个结果感到疑惑，为什么按照书上的步骤和要求去操作，培养基不能像以前那样正常凝固呢？ 我们几位负责配制培养基的社员，通过讨论与分析，首先猜想可能是由于培养基中琼脂量放的太少而造成的无法凝固。为了验证是否是琼脂量的多少影响了培养基的凝固，第二次实验时，我们又按书本中的要求称取了一份正确分量的琼脂来进行配制，又称取了一份过量琼脂配制的培养基，按失败那天的步骤来进行实验。可是，结果仍旧一样，还是不能正常凝固。既然与琼脂量的多少无关，那么…… 是因为用来调节PH值的NaOH和HCl溶液的份量不对吗？我们分了四组进行对照实验：一组滴加NaOH溶液使PH值调整到7.5；一组PH值调整到6.5；还有一组PH值调整到5.8；最后一组用HCl溶液使PH值调整到5.0。同样按失败那天的步骤继续进行探究实验。结果发现，四组竟然都无法凝固。于是肯定了调节培养基pH值的NaOH和HCl溶液也不是影响它凝固的因素。 可能会是因为溶解培养基时的温度不够高吧？但是，我们仔细回忆了实验过程时的温度情况，觉得这种猜想也被排除了。因为在整个实验探究过程中，我们都是要加热到沸腾后才冷却分装入培养瓶中的。 那到底是什么原因导致凝固失败？疑团越来越重。 我们请教了同层楼的化学老师，他说：“可能是因为培养基里面没有凝固颗粒。”随后，我们马上行动继续探索实验。这次我们按照前次配制的方法在培养基内中加入了少许的牙膏，使里面有凝固颗粒的存在。同样我们继续按照那天的实验步骤加以探索。第2天发现，培养基状态并没有什么变化，依旧没有凝固。 我们几个很失望，找了那么多的原因，还是没有发现问题的所在。在之后的讨论中，大家认为，既然无法在实验中找到问题所在，那么能否到网上去查找一下原因呢？ 经过上网查找和自己几个社团成员的分析，觉得会不会是6BA和NAA的溶液浓度在我们几个操作人的不经意之间配错了造成的呢？或许是消毒时间过长，破坏了琼脂的凝固质。还有一种可能，也许是配制的培养基过夜后再进行高温灭菌，导致溶质沉淀或者培养基的凝固度下降，从而阻碍了培养基的凝固。 是因为琼脂的纯度不够？不可能呀！我们的琼脂纯度是完全符合标准的。我们几位操作的同学一起回想。发现，在探究失败的那几次实验中，由于时间不够，都是把已分装好的琼脂搁置一个晚上，等第2天再来灭菌。本以为实验探究会成功。哪知，它却凝固不了。后来采访了实验员老师，她回忆道：“分装好的琼脂在你们离开后已经凝固过一次了，第二天灭菌后就再也凝固不了了。而且培养基基中有大量的小颗粒。”那么，可能性最大的一种——隔夜之后导致培养基已凝固过一次，再次高温灭菌，破坏了琼脂原有的凝固质。 经过这次实验探究，我对科学探究越来越感到了兴趣。我们经历了从“发现问题——进行猜想——分析讨论设计实验探究方案——实验探究验证猜想——最终找出问题所在——总结交流和发表实验探究成果”。经过这几次实验探究失败的体验，使我增长了不少知识，培养了我们的科学意识、科学精神和科学素养以及对问题的多角度的审视，增强了我们战胜困难的意志，也使我们明白，今后在实验探究过程中要更加具有细心和耐心，防止再次出现类似情况！ 徐贤琦、詹斌、薛瑞健 指导老师：赵沛荣 探究花卉组织培养过程中