靶向survivin基因的shRNA真核质粒表达稳定株的筛选和建立.pdfVIP

维普资讯 上海 口腔 医学 2008年 6月 第 17卷 第 3期 ShanghaiJourn~ofStomatologyVo1．17No3June，2008 ·275· [文章编号]1006—7248(2008)03—0275—05 · 基础研 究 · BasicScientificStudy 靶向survivin基因的shRNA 真核质粒表达稳定株的筛选和建立 王文霞 ，孙善珍 ，宋樱 。 (1．山东大学LI腔医学院 牙周科，2．LI腔病理科，山东 济南 250012) f摘要】目的：针对 survivin基因，构建短发卡状 RNA于扰 (shorthairpinRNAinterference，shRNAinterference)真核质 粒表达载体 ，并转染到高表达 survivin基 因的舌鳞癌细胞株 Tea8113中，筛选出稳定低表达 survivin基 因的细胞株 。 方法 ：针对 survivin基 因的mRNA序列设计 ，并合成 2对寡核苷酸序列 ，插入质粒 pSilencerMT一2．1U6一neo中，形成重 组质粒 (PS1和 I)S2)。用大肠杆菌扩增 ，酶切 、PCR、测序鉴定 ，用脂质体介导转染Tea8113细胞 ，G418筛选得到稳定 表达株 ，荧光实时定量 PCR和 Western印迹检测 survivin基 因在 mRNA和蛋 白水平 的变化 。采用 SAS8．0软件包对 数据进行 t检验 。结果 ：2个真核质粒表达载体均构建成功 ，并筛选 出转染成功 的细胞 。与对照组相比，PS1和 PS2转 染的Tea8113细胞 中的survivin基因在 mRNA水平均显著下降，PO．05；在蛋 白水平 ，PS2转染后显著下 降，P0．01。 结论 ：本研究成功建立针对 survivin基 因的shRNA质粒载体 ，并筛选 出稳定低表达 survivin基 因的Tea8113细胞 ，为 口腔鳞癌 的基 因治疗提供了理论基础 。 f关键词】Survivin基 因；RNA干扰；质粒 【中图分类号】R780．2 f文献标识码】A Selectionand construction ofcelllinestablyexpressing survivin geneinlowerlevelthrough eukaryoticplasmid vectorofshRNA WANGWen—xia SUNShan-zhen2,SONGYing。． ．DepartmentofPeriodontology,2．Departmentof OralPathology,CollegeofStomatology,ShandongUniversity．Jinan250012，ShandongProvince，China) A【bstract】PURPOSE：ToconstructashorthairpinRNA(shRNA)interferenceexpressionplasmidvectorofsurvivingene， transfecttonguesquamouscellcarcinomalineTea8113whichexpressed survivingeneinahighlevel， andchoosethe cellswhosesurvivingene