梅山与长大母猪下丘脑-垂体-卵巢轴Kiss1和GPR54基因的表达差异.pdfVIP

2011年 笼47卷 第 {3期 Reprod~~ctionandPhysiology ·繁骚生理 梅 山与长大母猪下丘脑 一垂体 一卵巢轴 Kissl和GPR54基因的表达差异 朱碧泉，李卓昭，吴 德 ，方正锋 ，林 燕，车炼强 (四川农业大学动物营养研究所，四川省动物抗病营养重点实验室，四川雅安 625014) 摘 要：研究早熟与晚熟品种母猪下丘脑 一垂体 一卵巢轴Kissl和 GPR54基因的表达差异。选用8头梅 山母猪 与 12头长大(LY)母猪为研究对象，梅 山母猪于70d和 100d屠宰，LY母猪于70、100d和 199d屠宰，收集血清 及下丘脑、垂体、卵巢组织样品。ELISA检测血清瘦素 (Leptin)ff~雌二醇(E)水平，PCR克隆梅 山与LY母猪Kissl 基因编码序列，实时荧光定量 PCR检测母猪下丘脑、垂体、卵巢组织Kissl和GPR54基 因表达水平。结果表明：梅 山与LY母猪K s基因编码序列相似性为 100％；梅山与 I』Y母猪初情期下丘脑K s基 因表达量极显著高于垂 体与卵巢(PO．01)，卵巢GPR54基 因表达水平显著高于下丘脑与垂体(P0．05)。梅山母猪下丘脑一垂体 一卵巢轴 Kissl基因表达水平都显著高于相同日龄和初情期LY母猪 (Po．05)，梅山母猪血清Leptin水平极显著高于相同日 龄LY母猪(P0．oi)。而E水平显著高于 100d与初情期 LY母猪 (尸0．O1)。Lep6n与下丘脑Kissl和GPR54基因 表达呈显著正相关(P0．05)，而E仅与下丘脑Kissl基 因表达有极显著正相关关系(P0．01)；梅 山与LY母猪 K／ss1基因编码区序列相似性为 100％，梅山母猪下丘脑 一垂体 一卵巢轴上kissl基因表达量较LY母猪 高，主要 原因可能是初情 日龄早，下丘脑Kissl基因表达水平的高低与血清Leptin和E浓度密切相关。 关键词 ：Kiss；GPR54；Leptin；E2；梅 山母猪 ；长大母猪 中图分类号：$828．3 文献标识码 ：A 文章编号 ：0258-7033(2011)13-0021-05 2003年，有学者研究发现 ，Ksisl受体基因GPR54 母猪为研究对象，克隆两品种猪KisslCDS编码区基 突变，鼠和人均无青春期发育现象，而且定向敲除 因序列 ，并检测在初情发育过程中相同 日龄与初情 Ksisl或 GPR54基因均可重复青春期发育丧失 的效 期时繁殖轴Ksisl和 GPR54基 因表达差异及血液 中 应 ，另外还发现正常哺乳动物鼠、羊、猴等在初情时 Leptin、E 的浓度变化，以探明早熟与晚熟品种猪繁 下丘脑 Ksisl基 因表达量有显著提高 ，因此下丘脑 殖轴Kissl和 GPR54基因表达差异及与血液 Leptin、 KSIsl／GPR54被确定为哺乳动物初情启动 的关键调 E浓度的相关性 ，以明确不同品种猪初情启动部分 控基因。Lents等Ⅲ发现，脑室内注射Kissl基因转录 分子机制 ，为繁殖机理探讨及繁殖的营养调控提供 产物 Kisspeptin一10可 以让后备母猪初情 日龄提前 ， 理论参考。 Tomikawa等 在初情期母猪下丘脑中成功克隆Kissl 1 材料与方法 基因并检测到该部位有高水平表达 ，这表明下丘脑 Kiss1／GPR54可能是母猪初情启动的关键调节基因。 1．1 材料 性早熟地方品种梅山猪平均初情 日龄为 90d左右 ， 1．1．1 样 品 选取 日龄相近、活泼健康 、无生殖缺 较晚熟 品种猪 LY初情时间提前 3～4个月 ，LY猪 陷的梅 山母猪 8头 (13．2±1．5)kg，IJY母猪 12头 100日龄与 70日龄梅山卵泡发育阶段相一致 ，然而 (20．4±1．8)kg。梅山母猪屠宰于 70 日龄 (19．3± 目前关于梅山猪 Ksisl基 因序列未见报道 ，不 同品 2．1)kg和初情期 (99．6±4．2)d、(35．5±2．