木霉菌发酵羊胃容物产木聚糖酶的分离纯化及特性.pdfVIP

生 物 技 术 2011年21(3) 木霉菌发酵羊胃容物产木聚糖酶的分离纯化及特性 徐枫 ，王和平 ’，孙庆林，张雄杰 (内蒙古农业大学生命科学学院，内蒙古 呼和浩特010018) 摘要：目的：为城市屠宰场牛羊胃容物类的生物垃圾型可再生资源的潜在工业化开发应用(城市无害鲜生物垃圾变废为宝的 低碳生物循环经济工程)提供了部分可靠科学依据。方法：M一112木霉菌固态发酵羊胃容物的粗酶提取液，经20-60％饱和度 的硫酸铵粗分级分离、SephadexG一25脱盐、SephadexG一150到SephadexG一100分子筛顺序纯化 ，通过蛋白质测定、酶活测定、 SDS—PAGE和底物一PAGE电泳等。结果：制备到一种分子量约为64．7kDa的电泳纯木聚糖酶，其回收率为5．59％，纯化倍数 1O．43。比活力为253．36IU／mg。纯化出的木聚糖酶，经性质研究表明，其Km=11．20’g／L，Vmax=0．701xmol／min；最适温度为 65~C，最适 pH为6．O，该酶在中温条件下稳定性好，在酸性至弱碱性(pH3．0～8．0)条件下稳定性好。结论：采用改 良的凝胶色 谱技术，首次纯化出木霉菌固态发酵羊胃容物所产的木聚糖酶。 关键词：木霉菌；固态发酵；羊胃容物；木聚糖酶；分离纯化 中图分类号：Q814．1 文献标识码：A doi：10．3969／j．issn．1004-31IX．2011．03．075 PutificationandCharaeterizationofXylna aseProducedbyTr／choderma inSolid—．stateFermentationofSheepGastricContents XUFeng，WANGHe—ping ，SUNQing—lin，ZHANGXiong—jie (CollegeofLifeandScience，InnerMongoliaAgriculturalUniversity，Hohhot010018，China) Abstract：Objective：Thedateofthisstudyprovidedsomereliablescientificbasisforpotentialindustrialdevelopmentapplicationofbio- logicalwaste—basedrenewbaleI~sources．Method：ThexylanaseWas separatde andpurifide from aculture filtrateofTr／chodermaM 一112 insolid—statefermentationofsheepgastriccontentsthroughammonium sulfateprecipitation，SephadexG一25columnchromatographynad SephadexG一150--~SephadexG一100successivecolumnchromatography．ThepurifiedxylnaaseWas provedbySDS—PAGEandNative PAGEtobeasinglecomposition．Result：Thexylanase’Smoleculra massWas 67．4kDa．TherecoveryrateWas 5．59％．Purificationfold was10．43nadthespecificactivityWas253．36IU／mg．Bystudyofchraaeterization，ItsKm is11．20g／L，andVmaxWas0．70p．mol／min， Optimum temperature Was65℃ ．hteoptimumpHwaft6．0；Th isxylanasehadgoodstabilityatmdeium temperature．Italsohad goodstbail ityatpH 3．0—8．0．Conclusion：ThexylanaseproducedbyTr／choderma insolid—statefermentation