转基因植物中标记基因定性PCR检测方法研究.pdfVIP

2011年 6月 中国油料作物学报 2011，33(3)：280—289 Chinesejournalofoilcropsciences 转基因植物 中标记基 因定性 PCR检测方法研究 岳运锋 ，吴 刚 ，武玉花。，卢长明。 (1．中南民族大学生命科学学院，湖北 武汉 430074； 2．中国农业科学院油料作物研究所，农业部油料作物生物学重点开放实验室，湖北 武汉430062) 摘要：为了建立以标记基因为检测靶标的高效定性检测方法，本研究系统地分折 l『口前中请商业化的转基因 植物中标记基因的应用频率，选 取了应用频率高或在未来应用潜力大的标记基因neomycinphosphotrar~feraseH (NPTI1)、phosphinothricin e竹transferase(PAT)、5一enolpyrul—shikimate一3一phosphatesynthtL~e(CP4一EPSPS)、 phosphinothricinacetyltransferase(bar)、hygromycinphosphotransferaseH(HPTI1)、卢一glucuronidase(GUS)和 phospho— lnannoseisomerase(删 ，)作为检测靶标 ，建立了这七个基因的普通PCR和实时荧光PCR检测方法。该研究建立的 普通PCR方法和实时荧光 PCR方法特异性强、灵敏度高、重现性好，适用于农产品中转基因成分的大规模筛查检 测，而且应用实时荧光PCR方法可大大提高检测效率，降低检测过程中样品交叉污染和环境污染的几率。 关键词：标记基因；筛查检测；普通PCR；实时荧光PCR 中图分类号：Q788 文献标识码 ：A 文章编号：1007—9084(2011)03—0280—010 DevelopmentofqualitativePCR methodatrgetingmarkergenesin transgenieplants YUE Yun—Feng ，WU Gang ，WU Yu—hua ，LU Chang—ming (1．CollegeofLifeScience，South—CentralUniversityforNationalities，Wuhan430074，China； 2．OilCropsResearchInstitute，ChineseAcademyofAgriculturalSciences，Wuhan430062，China) Abstract：Toestablishaneffectivescreeningmethodtargetingmarkergenesfordetectinggeneticallymodified plants，we systematically analyzed the currentapplication rfequency ofmarkergenesin commercialtransgenic plants，andofundthatsevengenes．includingNpTII，PAT CP4一EPsPS，bar，HPTlI，GUSandPMI，hadbeen usedinhighrfequencycurrentlyorcouldhavepotentialapplicationsinthefuture．Theconventional PCR andreal — — timePCR detectionmethodsweredevelopedwith thesesevengenesasdetectingtargets．ThePCR methodwas specific，sensitive，reproducibleandsuitableforlarge—scalescreeningdetectionofgeneticallymodifiedagrlcuhur- alproducts．Moreover，theapplication ofreal—timePCR detectionmethod couldbemoreefficient，andreduce cross——con