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Ezrin蛋白与肿瘤转移的关系
结题报告
项目负责人：罗茜
项目组成员：徐晓萌、刘华旭、刘丹、周瑞泉
指导老师 ：王悦 副教授
2011.4.22
南开大学医学院
About Ezrin
埃兹蛋白 (Ezrin)为膜细胞骨架连接蛋白，是连接细胞膜
和细胞骨架之间的ERM(Ezrin—radixin—mesin，埃兹
蛋白—根蛋白—膜突蛋白)家族成员之一。常与根蛋白、
膜突蛋白共同表达于细胞膜内侧。现在普遍认为它通过与
CD44，E-钙黏素(E-cadherin)、整合素等细胞表面分子
形成复合体，调节细胞粘附，参与肿瘤细胞信号转导和肿
瘤细胞吞噬等机制。
实验内容
建立荷瘤动物模型
提取小鼠腹腔巨噬细胞,提取RNA
人肠癌及正常标本, 提取RNA
RT-PCR法检测相关因子表达水平
结果分析
实验方法 建立动物模型
KM小鼠, 4-6周，雄性，
12只。
细胞：Lewis肺癌细胞
注射细胞数为106
方法：腹腔注射
建立动物模型
饲养30天后，体重变化：
34-37g~41-50g
腹围：10~13cm
成瘤率：40%
实验方法 小鼠腹腔巨噬细胞分离
1、断颈处死小鼠，酒精消毒，等待皮肤干燥。
2、腹腔注射5ml预冷培养基（1640），轻轻按摩腹部，5min。
3、打开腹腔，收集腹腔积液（呈黄色），置于15ml离心管。
4、离心，1200rpm，4℃，5min，弃上清，用PBS重悬。
5、再离心， 1200rpm，4℃，5min。
6、弃上清，加1ml TRIzol，置于-70℃保存。
实验方法 提取总RNA
鼠RNA的提取
1、-70℃取出两管，置于室温下融化。
2、加200 μl氯仿，振荡摇匀后静置15min。
3、离心，4℃，12000g，15min。
4、吸取上层水相，转移到EP管中。
5、加入500 μl异丙醇，振荡摇匀后，静置15min。
6、离心，4℃，12000g，10min，去上清。
7、加入1ml75％冰冻乙醇，悬浮沉淀。
8、离心， 4℃，8000g，10min，去上清。
9、加入30 μl去离子水。
10、测OD值。
实验组 对照组
RNA浓度μg/ml 24 10
A260/280 1.70 1.67
11、提取后的RNA置于-70℃保存。
实验方法 提取总RNA
人RNA的提取
1、取实验室储存人肠癌及正常标本, (标本数量4份，取自天津肿瘤医院)，
剪碎研磨，经Trizol破碎和溶解细胞后，抽提RNA。
2、后按Trizol试剂的标准操作抽提总RNA。
实验方法 RT-P
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