T2. 62 基于iTRAQ 技术筛选食管鳞状细胞癌相关蛋白质.pdfVIP

·５８· 中国药理学与毒理学杂志２０１３年１１月第２７卷增刊１　ＣｈｉｎＪＰｈａｒｍａｃｏｌＴｏｘｉｃｏｌ，Ｖｏｌ２７，Ｓｕｐｐｌ１，Ｎｏｖ２０１３ 月牙藻７２ｈ的生长抑制实验来评价样品Ａ对藻类的短期暴露效应。方法　样品Ａ几乎不溶于水，很难测 定溶解度，因此实验采用分散悬浮液。将一定量的样品Ａ加入到ＯＥＣＤ培养基中，超声辐射搅拌３０ｍｉｎ， 磁力搅拌器搅拌约４８ｈ，用玻璃纤维过滤器过滤，制备样品Ａ的储备液。根据预实验结果，正式实验设定一 －１ 个供试品分散悬浮液滤液的暴露组（名义浓度１００ｍｇ·Ｌ ），同时设置一个空白组，每组６个平行。暴露周 期７２ｈ。在暴露开始后的２４，４８和７２ｈ分别测定各组的藻细胞浓度，统计７２ｈ时暴露组的生长抑制率。 在实验开始和结束时测定各组的样品Ａ浓度。结果　ｐ实验开始时，分散悬浮液（滤液）的样品Ａ的实测浓 －１ －１ 度为０．１３ｍｇ·Ｌ ；实验结束时，样品Ａ的实测浓度为０．１１ｍｇ·Ｌ 。实验期间，温度控制在２２．５℃ ～ ２３．２℃；空白组ｐＨ的变化为０．１９，暴露组的ｐＨ变化为０．２２；光照强度的范围为５．１０～５．７０Ｋｌｕｘ，均满足 测试要求。在７２ｈ的试验周期内，空白组的藻类生物量最少增加到了３９．１４倍，相对应的生长率为１．２２ ｄ，满足测试指导要求的空白组的藻类生物量至少增加１６倍，相对应的生长率为０．９２ｄ；空白组阶段性平均 生长率（对７２ｈ试验来说是０～１，１～２，２～３ｄ）变异系数平均值为８．０７％，没有超过测试指导规定的 ３５％；整个实验周期内，空白组每个平行的平均生长率变异系数为２．０２％，没有超过测试指导规定的７％； 因此本次实验的有效性是符合的。实验结束时，样品Ａ对羊角月牙藻的生长抑制率为－１．２１％～４．１８％，平 －１ 均为０．９３％，均低于５０％。因此，样品Ａ在本次实验中对羊角月牙藻的７２ｈ－ＥｒＣ ＞１００ｍｇ·Ｌ （以名义浓 ５０ 度计算）。结论　在本次实验条件下，样品Ａ对羊角月牙藻在分散悬浮液（滤液）的暴露水平上没有观察到不 －１ 良影响，对羊角月牙藻没有急性毒性，样品Ａ对羊角月牙藻的７２ｈ－ＥｒＣ ＞１００ｍｇ·Ｌ （以名义浓度计算）。 ５０ Ｅｍａｉｌ：ｌｉｓｈｕａｎｇ＠ｓｚｘｓｚｋ．ｃｏｍ Ｔ２．６２　基于ｉＴＲＡＱ技术筛选食管鳞状细胞癌相关蛋白质 彭　媛，刘　冉，浦跃朴，尹立红 （东南大学公共卫生学院环境医学工程教育部重点实验室，江苏 南京 ２１０００９） 　　摘要：目的　筛选食管鳞状细胞癌（ＥＳＣＣ）血浆相关蛋白质，识别相关标志物用于食管癌的早期发现 与诊断。方法　选取病理或内镜诊断明确的原发性 ＥＳＣＣ患者血浆样品２８例，按１∶１配对原则，选取性别 相同、年龄相差±５岁、除消化系统疾病以外，同地区非肿瘤人群血浆样品２８例作为对照。将血浆样品按样 品来源７个一组混合成８例样品，利用安捷伦ＭＡＲＳ系统去除样品中的１４种高丰度蛋白后，采用ＧＥ公司 的２Ｄ定量试剂盒对其进行蛋白定量。封闭、酶解后用同位素相对标记与绝对定量（ｉＴＲＡＱ）技术对８例样 品进行标记，ＥＳＣＣ组分别标记为１１３，１１４，１１５，１１６；健康对照组分别标记为１１７，１１８，１１９，１２１。采用强 阳离子交换色谱（ＳＣＸ色谱）对样品进行分离纯化，液相色谱串联质谱进行检测分析。运用 ＰｒｏｔｅｉｎＰｉｌｏｔ软 件对数据进行分析处理，对ＳｗｉｓｓＰｒｏｔｐｒｏｔｅｉｎ数据库进行检索查询，对所得肽段进行分析鉴定及相应的统 计学分析，利用ＭＳ／ＭＳ中同一肽段不同报告基团的比值来进行相对定量，从而进行差异蛋白的筛选。对比 查询ｇｅｎｅｏｎｔｏｌｏｇｙ数据库和ＫＥＧＧｐａｔｈｗａｙ数据库，对差异蛋白进行ＧＯ分析和ｐａｔｈｗａｙ分析。结果　 利用ｉＴＲＡＱ