Im人成熟型TGF-β1重组表达载体的构建.pdfVIP

· 8 · 中国现代药物应用2008年 12月第 2卷第24期 ChinJM0dDrugAool，Dec2oo8，Vo1．2，No．24 Im人成熟型TGF一131重组表达载体的构建 曹雪梅 孙岩 李武修 唐胜建 高玉光 摘【要】 目的 构建人类成熟型TGF一131(hTGF-131)基因的表达载体，探索TGF．311在大肠埃希菌 中的表达，获得重组表达载体pET32a—hTGF311。方法 Trizol法抽提人新鲜胎盘组织的总 RNA，RT-PCR 法扩增人成熟型TGF一311基因，PCR产物纯化后经BglⅡ和 HindⅢ双酶切后与相同酶切的pET32a(+) 载体连接，构建重组载体pET32a—hTGF一311。结果 成功构建了hTGF—B1重组表达载体 pET32a—hTGF31。 结论 hTGF．B1基因的原核表达载体的成功构建，为下一步表达、纯化该基因的蛋白产物以及hTGF一311 多克隆抗体的制备提供了依据。 【关键词】 转化生长因子．t31；重组表达载体；pET32a(+)载体 ConstructionofrecombinantexpressionvectorinhumanmaturateTGFB·1 CAOXuem‘ei，SUNYan，L1 Wu—xiu，eta1．StomatologyMedicalUniversityofWe ngMedicalUniversity，Shandong261042，China 【Abstract】 Objective ToconstructexpressionvectorofhumanmaturateTGF—Bl(hTGF—1)inE． coli．obtainingrecombinantexpressionvectorpET32a．hTGF311．Methods ThehumanmatureTGF．B1wasam． plifiedbyRT—PCRfrom thetotalRNA ofhealthyperson’Splacentabytrizolagent，thenbothoftheprokaryotic expressionvectorpET32a(+)andhTGF一311geneweredigestedwithBglⅡandHindII1．Afterpurification， hTGF一311genewasinsertedintopET32a(+)，constructionrecombinantvectorpET32a-hTGF-311．Results SueceesstoconstructrecombinationexpressionvectorpET32a-hTGF311．Conclusion Oursuccessfulcloninglay abasisforexpressionandpurificationofhTGF-311proteinandtheproductionofhTGF一311polyclonalantibody． K【eywords】 Transforminggrowthfactor-311；Recombinantexpressionvector；pET32a(+)vector 转化生长因子一B1(transforminggrowthfactor—p， 的重量分装保存于液氮中，总 RNA的提取按 Gibco TGF．311)是一大类多功能的多肽生长因子，属于 BRL公司的Trizol试剂盒的步骤进行，用紫外分光 TGF．p超家族的成员之一。TGF—p在生物体 内分布 光度仪测定总RNA的浓度和纯度，．8O℃保存备用。 广泛，血小板、胎盘、肾及骨组织等均有分布，其中 1．2．2 逆转录得到hTGF．B1基因cDNA及PCR扩 血小板和骨组织 中含量最丰富 。在骨组织中 增 目的基因 以提取人胎盘的总RNA为模板，根据 TGF一131最为丰富，TGF．311与 TGF．B2的比例接近 Genbank已发表 的人成熟型TGF—B1基因 cDNA的 4：l2J 。 因此，TGF．311多肽在应用及研究领域甚 全长CDS，分析 目的基因内部的限制性酶切位点，结 广。TGF．311是创伤愈合过程中重要的调控因子，广 合在载体pET32a(+)插入外源基因的需要，利用 泛作用于多种组织的修复过程。为了进一步了解