PRL-3及其同源异形体重组杆粒的构建和鉴定.pdfVIP

第 26卷第 5期 广 东 医 学 院 学 报 VoI_26No．5 2008年 1O月 JOURNALOFGUANGDONGMEDICAL COLLEGE Oct．2008 489 PRL．3及其 同源异形体重组杆粒的构建和鉴定 何太平 ，熊 亮 ，莫丽儿2，梁念慈 ，2 (1．广东医学院生物化学与分子生物学研究所；2．广东天 然药物研究与开发重点实验室 ，广东湛江 524023) 摘 要：目的 构建PRL．3及其同源异形体重组杆状病毒表达载体，为下一步表达 PRL一3及其同源异形体蛋 白并从 中草药活性成分中筛选出PRL一3抑制剂奠定基础。方法 应用 RT—PCR方法从高转移卵巢癌细胞 HO-8910PM 扩增 PRL一3及其同源异形体编码序列，克隆到供体质粒 pFastBacHTB，在DH10Bac菌中进行同源重组，经 3种抗生素和蓝白斑 筛选 ，得到Bacmid—HTB—PRL．3和Bacmid．HTB—PRL一3一variant，PCR鉴定其正确性。结果与结论 成功构建了PRL．3及其 同源异形体重组杆粒。 关键词 ：PRL．3；杆状病毒；基因重组 中图分类号：Q784 文献标识码 ：A 文章编号：1005—4057(2008)05．0489—04 COnstructiOn OfPRL-3generecOmbinantbaculOVirusVectOr HE Tai—ping ，X10NG Liang ，MO Li—er。， LIANG Nian—ci，(InstituteofBiochemistryandMolecularBioIogy，Guangdong MedicalCollege，Zhanjiang524023，China) Abstract：ObjectiVe I_oconstructrecombinantBacmidofPRL一3anditsVariant．Methods PRL一3anditsVariantcDNA wereamplifiedfrom totalRNA ofHO_89l0PM byRT—PCR，andinsertedintoplasmidpFastBacHTB．TherecombinantBacmid ofPRL一3anditsvariantwasscreenedbythreeantibioticsandBlu gal，confirmedbyPCR．ResullsandCOncIusiOn There— combinantBacmidofPRL一3anditsvarianthadbeensuccessfullyconstructed．Itpr0videSabasisf0rfurtherstudyofexpression ofPRL一3anditsvarjantproteinsandscreeningsmallmoleculeinhibitorsfrom activecomponentsofChinesetraditionaland herbaldrugs． Keyw0rds：PRL一3；baculovirus；generec0mbination 促肝细胞再生磷酸酶一3(phosphataseofregenerat— 力-l34J。我们 的前期研究也表明PRL一3在人高转移卵 ingliver一3，PRL一3)又名 PTP4A3，分子量只有 21kd， 巢癌细胞也高表达_5j，并在本实验过程 中同时得到了 被称为小分子 的蛋 白酪氨酸磷酸酶，一级结构 由 173 PRL_3及其 同源异形体 的 cDNA序列 ，两者相差 个氨基酸组成 ，二级结构有 4个 a螺旋 、5个 8折叠和 75bp，但 PRL一3同源异形体的功能 目前 尚不清楚。本 一 个 P环构成-1J。由于其 C末端含有 CA_Ax序列 (其 文旨在同时构建PRL一3及其 同源异形体的重组杆粒， 中C代表半胱氨酸)，因此 PRL一3在细胞 中需经异戊 从而为在昆虫细胞 中表达、纯化和鉴定得到具有酶活 二烯化 “锚定”于细胞膜上 ，才能发挥其生物学功能，当 性的人 PRL一3及其 同源异形体、比较两者