水稻高亲和力磷酸盐转运蛋白基因的克隆、表达及检测.pdfVIP

第 44 卷　第 4 期 ( ) Vol. 44 No. 4 复 旦 学 报 自然科学版 2005 年 8 月 Journal of Fudan Universit y (Natural Science) Aug. 2005 　　文章编号 : (2005) 水稻高亲和力磷酸盐转运蛋白基因 的克隆、表达及检测 1 ,2 ,3 2 ,3 1 2 ,3 1 2 ,3 路　群 , 明　凤 ,娄玉霞 ,张珊珊 ,周根余 ,沈大棱 ( 1. 上海师范大学 生命与环境科学学院 ,上海 　200234 ; 2. 复旦大学 生命科学学院 ,遗传学研究所 ,遗传工程国家重点实验室 ,上海 　200433 ; 3. 基因多样性与设计农业中心 ,生物多样性与生态工程教育部重点实验室 ,上海 　200433) ( ) 摘 　要 : 以水稻 粳稻 cDNA 为模板 ,设计一对特异性引物 ,获得编码水稻高亲和力磷酸盐转运蛋白基因的全序 列 ,ORF 区编码含 535 个氨基酸的蛋白 ,具有磷酸盐转运蛋白保守的蛋白激酶 C 作用位点、N 端糖基化位点与 酪蛋白激酶 Ⅱ作用位点. Southern blot 分析显示此基因在水稻基因组中具有多个拷贝 ,与水稻基因组序列分析 结果一致. Western blot 预测目的基因表达的蛋白大小约为 57. 7 ku. 该基因的真核表达研究正在进行中. 关键词 : 高亲和力磷酸盐转运蛋白 ; 水稻 ; Southern blot ; Western blot 中图分类号: Q 946 　　　　　文献标识码 : A 　　植物在低磷环境下 ,限制植株生长的主要因素为植物对磷的吸收能力 ,而其中根系的重要性尤为突 出. 根据对磷的吸收能力可将磷酸盐转运蛋白分为高亲和力转运蛋白与低亲和力转运蛋白 ,其中高亲和力 1 磷酸盐转运蛋白 K 值为 1. 8～9. 9 μ ,低亲和力磷酸盐转运蛋白 K 值为 mmol/ L 数量级 ,但是 m mol/ L m 2 土壤饱和溶液中磷的浓度仅为 1～10 μ ; 由此可见,在土壤溶液中 ,植物根系从土壤吸收磷主要是 mol/ L 依赖于高亲和力磷酸盐转运蛋白的作用. 因此植物高亲和力磷酸盐转运蛋白的分离与功能研究越来越受 到科学工作者的重视. 目前已从以拟南芥为代表的植物中分离出编码高亲和力磷酸盐转运蛋白基 因3 ～6 ,并通过酵母突变体、原位杂交等技术手段 ,揭示磷酸盐转运蛋白编码基因具有根系表达的特异 性3 ,5 、磷缺乏诱导该基因的快速表达4 ～6 及磷恢复供给则表达逆转5 ,6 等. 本研究是以单子叶的模式植 物水稻作为材料 ,分离出高亲和力磷酸盐转运蛋白编码基因 OrL PT1 , 目的是揭示该基因的表达模式、功 能与该基因诱导表达与水稻耐低磷胁迫程度的关系. 1 　材料与方法 1. 1 　材料 ( ) α 水稻材料为粳稻品种 J X17 O ryz a sat