胶体金免疫层析技术及其在猪病诊断上的应用.pdfVIP

2010第 4期 养猪 SWINEPRODUCTION 65 胶 体 金 免疫 层 析 技 术及 其在 猪 病诊 断上 的应 用 周盛华一，崔尚金 ，戚 亭 ，岳丰雄 (1．中国农业科学院哈尔滨兽医研究所生物技术国家重点实验室猪传染病研究室，黑龙江 哈尔滨 150001； 2．东北农业大学动物医学院，哈尔滨 150030) 中图分类号：$858．284．4+3 文献标志码 ：A 文章编号：1002—1957(2010)04—0065—05 免疫胶体金技术在人类医学上是一种常用 的 白质有很强的吸附功能，可以与葡萄球菌A蛋白、 标记技术，有其独特的优点。胶体金标检测颗粒是 免疫球蛋白等以非共价结合，形成金标蛋白结合物。 一 种球形粒子，对蛋白质具有很强的吸附功能，可与 在显微镜下，金标蛋白结合物呈黑褐色颗粒，当这些 葡萄球菌A蛋白、免疫球蛋白、毒素、糖蛋 白、酶、抗 标记物在相应的配体处大量聚集时，肉眼可见红色 生素、激素等以非共价结合…。利用这一特性，近年 或粉红色斑点，因而 目前金标广泛应用于快速检测 来将免疫胶体金技术引入生物医学领域，并得到了 方法中。 日益广泛的应用。其在免疫学中的应用主要包括胶 胶体金免疫层析快速诊断试纸条是利用抗原抗 体金在光镜水平的应用、胶体金在电镜水平的应用、 体反应，在硝酸纤维素膜 (NCM)上预先固定好特异 凝集试验、免疫印记技术、斑点免疫金银染色法、斑 性抗原 (或抗体)和第二抗体两种捕获剂 ，分别作为 点金免疫渗滤测定法、胶体金免疫层析法等 。免疫 检测带 (T带)和质控带 (C带)。反应物是固定于胶 胶体金技术的起源可以追溯到 1971年，Faulk等I3】首 体金结合垫上并标记了抗待测物抗体的胶体金微 先将兔抗沙门氏菌抗血清与胶体金颗粒结合，用直 粒。样品液滴加在样品垫上，样品液先溶解固定在结 接免疫细胞化学技术检测沙门氏菌的表面抗原，这 合垫上的胶体金，并与之反应形成复合物。当溶液在 标志着胶体金作为标记技术应用于免疫学检测研究柳。 毛细管作用下到达抗原区域 (T带)时，T带上的特 最近 30多年来，免疫胶体金快速诊断技术因快速 异性抗原与待测物和胶体金复合物再次发生特异性 简便，已在人医的临床检验和其它领域取得广泛的 结合，而被截留在T带上，并显示出颜色。因此 ，可 应用，如妊娠试验、传染病病原抗体的检测、蛋白质 以根据试纸条T带的颜色深浅或有无来判断溶液 的检测和药物测定等[5j。而在动物医学方面最近5 中是否含有待测物。结果判定以试纸条硝酸纤维素 年也得到广泛应用[61，本文对胶体金免疫层析技术 膜上 T带和c带都出现红色条带为抗原阳性；仅 c (GICA)及其在猪病诊断上的应用做一简要综述。 带出现一条红色条带为阴性；如果无红色条带出现 1 胶体金免疫层析技术的基本原理 则视为试剂失效 。结果确定时间：强阳性标本在 氯金酸 (HAuCh4·H，0)在还原剂如 白磷、抗坏 5min内即可在检测线处见到红色胶体金颗粒聚 血酸、枸橼酸钠、鞣酸等作用下，可聚合成～定大小 集，弱阳性标本约需 10min确定。 的金颗粒，它带负电而且疏水，由于静电作用和布朗 2 胶体金的制备方法 运动，金颗粒和水成为稳定的胶体状态称胶体金。 胶体金溶液的制备有许多种方法，其中最常用 胶体金标记，实质上是蛋白质等高分子被吸附到胶 的是化学还原法，基本原理是向一定浓度的金溶液 体金颗粒表面的包被过程。吸附机理可能是胶体金 内加入一定量的还原剂使金离子变成金原子。目前 颗粒表面负电荷与蛋白质的正电荷基团因静电吸附 常用的还原剂有 白磷、乙醇、过氧化氢、硼氢化钠、抗 而形成牢固结合。用还原法可以方便地从氯金酸制 坏血酸、枸橼酸钠、鞣酸等。下面分别介绍制备不同 备各种不同粒径、也就是不同颜色的胶体金颗粒，其 大小颗粒的胶体金溶液的方法。 颗粒散在，直径从几纳米到几十纳米不等。由于不 2．1 制备胶体金 的准备 同直径胶体金的光散射各异，所以其溶胶颜色的深 2．1．i 玻璃器皿的清洁 制备胶体金的成败除试剂 浅相应发生显著的变化。同时这种球形的粒子对蛋 因素以外，玻璃器皿清洁是非常关键的一步。如果玻