核酸分子杂交技术一、核酸分子杂交基本原理与分类.pptVIP

分子杂交技术的目的是什么？ 分子杂交的基本方法有哪些？ Southern印迹法有哪些步骤，为了达到什么目的呢 为什么叫印迹法呢？ 1975，Southern 印迹杂交法: DNA 1977，Northern印迹杂交法：RNA 1979，Western印迹杂交法：Protein 由Southern 1975年设计。 被检测对象为DNA。 具体研究什么呢？ 克隆基因DNA的酶切图谱分析 【哪里可以剪开】 基因组中某一基因的定性与定量分析 【有没有这个基因；在哪里】 基因点突变【在哪个地方出现突变】 限制性片段长度【可以被剪开的片段多长】 （一）待测核酸样品的制备 提取待测DNA 用限制酶将DNA切成大小不同的片段 用EDTA，65℃灭活限制酶，进入下一步骤——电泳分离片段。 （二）电泳分离DNA片段 目的：确定杂交靶分子的大小【待测片段】 原则：分辨大片段用低浓度胶； 分辨小片段用高浓度胶 如何确定片段大小：用marker 【标准分子量DNA】 胶的注意事项有四条，一起来看书： （三）印迹转移前凝胶的预处理 分子量不同所需转移的时间不同； 浸泡在0.25M的HCL溶液中脱嘌呤 再进行碱变性，待测DNA链断