CALUX法测定氯丹污染土壤的光致二恶英类活性变化.pdf

持久性有机污染物论坛2009暨第四届持久性有机污染物全国学术研讨会论文集 CALUX法测定氯丹污染土壤的光致二恶英类活性变化 卓琼芳1，余刚H，张望1，黄俊卿2，村田弘司2 (1清华大学环境科学与工程系，持久性有机污染物研究中心，北京，100084；2株式会社日吉， 1．引言 氯丹是斯德哥尔摩首批列入控制的12种POPs之一，在我国主要用于白蚁防治。由于我国的 氯丹生产厂家规模较长小、生产环境简陋、管理较差，生产厂地土壤的氯丹污染现象较为严重。已 有的文献表明，各种氯代有机物在一定的光照条件下可能会转化为二恶英类。例如：Skurla=cov等在 Liu报道在 400w汞灯照射氯酚溶液过程中，检测到PCDD／Fs，自由基形成是重要成因。Peng．Yan 用300W中压汞灯照射粉沙壤土，粉质粘土和粘性土壤过程中，检测到七氯和八氯二苯并．对．二恶 英产生。因此有必要研究氯丹污染土壤的光致二恶英类活性变化，从而为其环境风险评估与管理提 供依据。 相对于耗时、昂贵的同位素稀释高分辨气相色谱质谱法(HRGc／HRMS)方法，生物检测法提 供了快速、廉价的二恶英类活性的检测手段。本研究采用荧光素酶报告基因法(CALUX)来测定 氯丹污染土壤的光致二恶英类活性变化。 2．材料与方法 2．1试剂与仪器 氯丹污染土壤(江苏某生产厂家的氯丹生产车间)、XPA．5型固体光化学反应器(南京胥江机 实验细胞来自美国xDS公司的小鼠重组基因HlL6．1c2：正己烷。壬烷，甲苯，甲醇，丙酮， 乙酸乙酯均为农残级，购自日本Wako公司；硫酸为超级分析纯，购自W狄。公司；RPMI1640基 Kanto公司。。 2．2光照实验 光照实验在带风扇的XPA．5型固体光化学反应器中进行，将15 cm g氯丹土壤平铺在27×18 w 的样品支承板上，样品距离光源石英冷阱3cm，设计两组光照实验：(1)未滤光条件下：用500 中压汞灯(石英冷阱装入循环自来水)照射氯丹污染土壤，按一定时间间隔取样用cALUX方法测 mo儿 定。(2)滤光条件下：用0．00125mo儿Na3V04滤光液滤掉200一276m波段的紫外光后(O．00125 Na3V04滤光液装入石英冷阱)照射氯丹污染土壤，按一定时间间隔取样用CAUⅨ方法测定。 2．4样品处理 室内自然风干，于冰箱中保存．用冷冻干燥机干燥24h后，用研钵磨细过65目铜筛于磨口棕 色样品瓶中，放冰箱内保存。 CAUJ)(生物检测样品预处理：称取3．59冷冻干燥样品用20％甲 醇／甲苯超声萃取，离心分离。萃取液通过25mL玻璃柱(用玻璃棉，545硅藻土，无水硫酸钠填 充)以净化。真空旋蒸后加入正己烷超声，过25mL硫酸酸化的硅胶柱(用玻璃棉，30％硅藻土， 无水硫酸钠填充)和活性炭柱(用玻璃棉，1％活性炭／硅藻土，无水硫酸钠填充)以纯化。用15mL 乙酸乙酯／甲苯／正己烷(1：1：8体积比)混合液洗脱DL．PCBs组分，再用20IIlL甲苯洗脱得到 PCDD忭s组分。真空浓缩后超声溶解于4InL正己烷中以待生物分析． 2．5细胞实验 ● h。 枪移入96孔板中并在37℃湿化的C02培养箱中培养24再将PCDD／Fs和DL．PcBs洗脱液以 合适的比例稀释后曝露于细胞中。九个已知浓度的2，3，7，8-TCDD标准溶液(含有O．488．125 p鲈1lL 解缓冲液，用荧光仪测定标准溶液和样品的相对发光量。标准曲线的拟合通过四变量Hill方程．土 146 持久性有机污染物论坛2009暨第四届持久，陛有机污染物全国