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实验三 蚕豆细胞微核试验在环境监测中的应用 前言 随着社会的发展,工业化水平的不断提高,大量有毒有害的废弃物排放到大气、水体和土壤中,给环境带来巨大危害,控制环境污染就需要一些行之有效的检测手段。 应用蚕豆根尖微核试验监测环境致突变物,简便可靠,经济易行,是国际上广泛使用的环境监测方法。 微核如何产生? 诱变因素如射线、重金属污染的水体与土壤、有机废水等导致的DNA链的初级损伤如碱基交联、聚合、取代基的结合或DNA链断裂,或经过一次S期的错误复制,或经过G2期的一次错误修复便可出现畸变,再经过一次细胞分裂,方形成微核。 为何蚕豆根尖微核试验可用于环境监测? 随着诱变因素水平的升高,错误复制与错误修复机率增加,微核形成机率也增加了。 反之,高的微核发生率也就意味着环境中高的诱变因素水平。 应用举例 评估污水处理厂污水处理效率:对污水处理前后的微核千分率进行比较,可有效指示污水处理效果。 对化妆品致突变作用的检测:嵇庆等(1994)用蚕豆根尖微核法检测了10种脂溶性面霜的致突变性,结果其中的3种有致突变作用。 为什么要以蚕豆根尖为试验材料? 染色体数较少(2n=12)且形体大,便于观察 对诱变物的反应较敏感,微核本底值较低 根尖分生组织有大量的细胞同步进行有丝分裂 便宜 如何在显微镜下判断微核? 在400倍显微镜下,凡小于主核1/4以下的,同主核有相同染色效果的,圆形、椭圆形或其他类似形状的染色物质都可以算作微核。 微核千分率与微核细胞千分率的区别 一般情况下,有微核的细胞中只有一个微核存在,但也有极少数的例外,一个细胞中含有两个、三个甚至更多的微核。 微核细胞千分率是指每一千个细胞中含有微核的细胞个数。 微核千分率是指每一千的细胞中所含微核数。 实验步骤 蚕豆培养(约5-6天) 待测液处理(1天) 恢复培养(1天) 根尖固定(1天) 解离(15-20分钟) 染色(5分钟) 制片观察、微核计数 使用显微镜观察微核的注意事项 不要随意挪动显微镜 镜头脏了要使用镜头纸擦拭 调整焦距时不要一直使用粗螺旋 先用低倍镜确定视野,再用高倍镜进行观察和计数 光强要合适,否则眼睛容易疲劳 耐心计数,不要一目十行 * * 植物生物学实验—植物生态学实验部分 微核千分率与镉离子浓度的关系 蚕豆(Vicia faba )
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