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分子诊断在肿瘤诊断及个体化
治疗中的应用与进展
叶建伟
吴阶平医学基金会分子医学中心
肿瘤分子诊断策略 检测平台的综合应用
肿瘤/个体相关基因变异
染色体水平改变 DNA局部变异 RNA表达水平差异 蛋白质表达差异
FISH 未知突变 已知突变 实时定量PCR 等 IHC/ELISA
广泛分布 局部突变
20% 低含量
DHPLC 测序 实时荧光PCR 等
多层次检测平台的综合应用
分子生物学技术
Clinical Cancer Research 2007; 13(17): 4954-5
其他分子生物学技术：DHPLC+后荧光、突变富集PCR+DHPLC后荧光、突变富集PCR
+RFLP+DHPLC后荧光、突变富集PCR+直接测序……
细胞生物学技术：FISH、FACS
蛋白质组学技术：IHC、ELISA、蛋白质指纹图谱
不同检测水平的综合应用
中 心 法
则：
DNA
RNA
蛋白质
经典检测方法与结果示例
直接测序
• DNA提取
• PCR扩增
• 测序 EGFR exon19
c.2231del (CAAGGAATTAAGAGAAGC) 18bp
• 优势：直接获取已知/未知DNA突变信息，准确可靠。金标准！
• 局限性：检测肿瘤组织的DNA变异时，最高灵敏度为20% 。
• 适用范围：个体遗传学背景检测
大部分肿瘤组织、体液中肿瘤脱落细胞DNA变异检测
实时荧光PCR C C
DNA提取 T
DNA提取
Real‐time PCR扩增
Real‐time PCR扩增
优势：快速，防污染，灵敏度极高，结果准确可靠。
优势：快速，防污染，灵敏度极高，结果准确可靠。
局限性：仅针对已知变异。
局限性：仅针对已知变异。
适用范围：个体遗传学背景检测
适用范围：个体遗传学背景检测
肿瘤组织、体液中肿瘤脱落细胞、外周血游离肿瘤DNA变异测
肿瘤组织、体液中肿瘤脱落细胞、外周血游离肿瘤DNA变异测
突变富集PCR+DHPLC C
血浆游离肿瘤DNA提取
血浆游离肿瘤DNA提取
穿刺活检组织DNA提取
穿刺活检组织DNA提取
突变富集PCR
突变富集PCR
DHPLC （+后荧光）
DHPLC （+后荧光）
优势：高度灵敏（1/
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