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2010;30(5) 南方医科大学学报(JSouthMedUniv) 窑969 窑
地高辛标记斑马鱼cd99l2基因RN 探针的制备
1 2 2 2 2 3 1,2 1 2
温宗华 袁张 艳 袁吴自勍 袁周新华 袁韩西群 袁张文清 袁赵 彤 渊南方医科大学 南方医院病理科袁 广东省分
3
子肿瘤病理学重点实验室袁 细胞生物学教研室袁广东 广州 510515冤
摘要院 目的制备用于斑马鱼胚胎早期cd99l2基因时空表达检测的地高辛标记RN 探针遥 方法设计引物袁 构建
cd99l2/pGM-T 重组质粒袁用SacII 和SalI分别进行酶切得到线性化DN 片段袁以Sp6RN 聚合酶和T RN 聚合酶
7
转录合成地反义和正义地高辛标记的RN 探针袁 用整体原位杂交法检测斑马鱼胚胎早期cd99l2基因的表达遥 结果
成功构建了cd99l2/pGM-T 重组质粒袁体外转录获得反义和正义RN 探针袁反义探针杂交检测证实cd99l2基因在斑马
鱼胚胎早期发育过程中中枢神经系统呈现高表达袁正义探针未检测到表达信号遥 结论本研究制备的反义cd99l2RN
探针袁兼顾了特异性和敏感性袁能有效检测斑马鱼胚胎早期cd99l2基因的定位表达袁而正义探针可以作为阴性对照袁为
进一步探究cd99l2基因在斑马鱼发育过程中的作用机制奠定了基础遥
关键词院斑马鱼曰原位杂交曰探针曰cd99l2
中图分类号院R392.1 文献标识码院 文章编号院1673-4254(2010)05-0969-04
PreparationofRNAprobeforcd99l2 geneofzebrafishlabeledwithdigoxingenin-UTP
1 2 2 2 2 3 1,2
WENZong-hua ,ZHANGYan,WUZi-qin,ZHOUXin-hua,HANXi-qun,ZHANGWen-qing,ZHAOTong
1 2
DepartmentofPathology, NanfangHospital , KeyLabforMolecularTumorPathologyofGuangdongProvince , DepartmentofCell
Biology3,SouthernMedicalUniversity,Guangzhou510515,China
Abstract: Objective Tostudytheexpressionpatternof cd99l2 geneduringzebrafishdevelopment, theRNAprobesfor
whole-mountinsituhybridizationwerepreparedinthisstudy. Methods The cd99l2 fragment obtained byRT-PCR was
clonedintopGM-TEasy, thentheplasmidswerelinearizedwiththerestrictionenzymes SacIIorSalI. UsingSp6orT RN
7
polymerase, thedigoxingenin-
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