华贵栉孔扇贝三个抗氧化相关基因的克隆及其在急性低温胁迫下的表达特性.pdfVIP

摘要 摘 要 摘 摘 摘 要 要 要 华贵栉孔扇贝是我国南方沿海的重要海水养殖贝类之一, 具有重要的经济价值。 这种 扇贝不但贝壳具有橙色、 橙紫色 、 紫色、褐色等多种绚丽的色彩,而且闭壳肌、外套膜等 肌肉也有橙色与白色之分。 我们的前期研究发现 , 橙色个体 贝壳、 外套膜、 闭壳肌都是橙 色 各 组 织 中 的 类 胡 萝 卜 素 含 量 均 显 著 高 于 褐 色 个 体 贝 壳 褐 色 、 外 套 膜 与 闭 壳 肌 均 为 白 色 ,并且前者比后者具有更高的抗氧化能力。 在 生 物 系 统 进 化 过 程 中 , 动 物 细 胞 为 了 保 护 自 身 免 受 损 伤 , 形 成 了 一 套 由 抗 氧 化 酶 体 系 如 超 氧 化 物 歧 化 酶 S O D 、 过 氧 化 氢 酶 C A T 、 谷 胱 甘 肽 过 氧 化 氢 酶 G P X 等 和 抗 氧 化 非酶体系 如类胡萝卜素、 辅酶 Q 、 硒、 维生素、 含巯基化合物等 组成的抗氧化防御体系 , R O S S O D 以 维持体内 的 动态平衡,起到抗氧化的作用。 在 清除活性氧反应过程中第一个 发挥作用, 它将超氧阴离子自由基快速歧化为过氧化氢和分子氧; 过氧化氢在 C A T 和 G P X 的作用下转化为水和分子氧。 因此, 本文选 C uZ nS O D 、 M nS O D 、 C A T 作为抗氧化的研究 对象。 本文以课题组建立的华贵栉孔扇贝橙色品系和褐色品系为材料, 采用 36h 的急性低温 胁 迫 后 , 获 得 二 者 的 外 套 膜 、 鳃 、 卵 巢 、 血 液 等 组 织 样 品 。 然 后 克 隆 了 C nC uZ nS O D 、 C nM nS O D C nC A T c D N A 、 等 三 个 基 因 的 全 长 , 并 进 行 了 同 源 性 分 析 、 时 空 表 达 分 析 , 测 定 和 比 较 胁 迫 组 与 对 照 组 样 品 的 总 类 胡 萝 卜 素 含 量 T o t a l C a r ot e noi ds C ont e nt , T C C 以 及 抗 氧化相关酶活性等指标, 从分子水平上探讨急性低温胁迫下橙、 褐色两个品系中类胡萝卜 素含量与其抗氧化防御之间的相关性。主要结果如下: 1 1 1 1 、 三 个 抗 氧 化 基 因 全 长 c c c c D D D D N N N N A A A A 序 列 的 克 隆 。 首 先 从 本 课 题 组 454 测 序 数 据 库 中 获 得 C nC uZ nS O D 、 C n M nS O D 以及 C nC A T 基因的部分 c D N A 序列 , 然后利用 R A C E - P C R 以及 通 过序列拼接获得它们的全长 c D N A 。 C n C uZ nS O D 基 因为 1078bp, 共编码 154 个 氨基酸 残基; C nM nS O D 基因全长序 为 1047 bp, 共编 码 226 个氨基酸残基; C n C A T 基因为 1851bp, 共编码 522 个氨基酸残基 。 同源分析发现, 这三个基因与栉孔扇贝 C hl am y s f ar r e r i 、 虾夷 扇贝 M i z uhope c t e n y e s s oe ns i s 以及海湾扇贝 A r gope c t e n i r r adi ans 显示出更近的亲缘关系, 它们先汇成一支后, 之后依次与其它海洋贝类 、 昆虫 、 虾、蟹等节肢动物聚类,最后与脊 椎动物聚类。 I摘要 2 2 2 2 、 比 较 了 三 个 基 因 在 橙 、 褐 色 两 个 品 系 间 的 时 空 表 达 。 采 用 r e a l - t i m e P C R 方 法对橙 色与褐色品系各组织中 C nC uZ nS O D 、 C nM nS O D 以及 C nC A T m R N A 绝对含量及对急性低 温胁迫下各组织中三个基因相对含量进行检测。三个抗氧化基因均在鳃中表达水平最高, 而在别的组织间表达水平就有所差异。 急性低温胁迫下, 三个基因的表达量在橙、 褐色两 个品系扇贝的血液、 鳃和外套膜上均出现了一种先升后降然后再升最后降至最低的变化趋 势,并且多数情况下在橙色品系组织中的表达量高于褐色品系组织的表达量。 3 3 T T C C C C S S O O D D C C A A T T 3 3 、 急 性 低 温 胁 迫 下 , T T C C C C 、 S S O O D D 和 C C A A T T 酶 活 性 的 变 化 情 况 。 急 性 低 温 胁 迫 下 , 橙 色