小鼠子宫珠蛋白结合蛋白的生物信息学分析及其多克隆抗体制备.pdfVIP

生理学报 Acta Physiologica Sinica, April 25, 2013, 652: 217?223 217 http:// 研究论文 小 鼠 子 宫 珠 蛋 白 结 合 蛋 白 的 生 物 信 息 学 分 析 及 其 多 克 隆 抗 体 制备 1,2 1 1 1 1 1,* 李 晨 ,刘 伟 ,汉建忠 ,冯丹丹 ,刘惠君 ,罗自强 1 2 410078 046000 中南大学湘雅医学院生理学系,长沙 ; 长治医学院生理学教研室,长治 摘 要 : 本 文 旨 在 制 备 小 鼠 子 宫 珠 蛋 白 结 合 蛋 白mouse uteroglobin binding protein, mUGBP 多 克 隆 抗 体 , 为 后 续 研 究 工 作 奠 mUGBP 定 基 础 。 通 过 生 物 信 息 学 分 析 方 法 预 测 蛋 白 的 跨 膜 结 构 、 理 化 特 性 、 疏 水 性 等 因 素 , 设 计 出 两 段 多 肽 , 分 别 与 匙 孔 戚 血 蓝 蛋 白keyhole limpet hemocyanin, KLH 交 联 后 免 疫 新 西 兰 兔 , 结 果 显 示 其 中 一 个 含13 个 氨 基 酸 残 基 的 多 肽 序 列 8 221st~233rd mUGBP ELISA 1:10 可 用 作 抗 原 免 疫 动 物 , 并 成 功 获 得 高 效 价 的 抗 多 克 隆 抗 体 。 通 过 法 检 测 其 效 价 为 , 亲 和 层 析 纯 化 后Western blot 检 测 抗 体 特 异 性 , 并 将 制 备 的 抗 体 应 用 于 免 疫 印 迹 及 人 和 小 鼠 肺 组 织 免 疫 组 织 化 学 和 免 疫 荧 光 检 测 , UGBP 结 果 显 示 本 研 究 制 备 的 抗 体 具 有 特 异 性 , 且 用 该 抗 体 成 功 在 人 和 小 鼠 气 道 上 皮 细 胞 和 肺 血 管 内 皮 细 胞 检 测 到 蛋 白 表 达 。 结 果 表 明 , 本 研 究 通 过 生 物 信 息 学 方 法 成 功 预 测 了 抗 原 表 位 , 并 据 此 预 测 成 功 制 备 了 高 效 价 、 高 特 异 性 的 抗mUGBP 多克隆抗体。 关键词:子宫珠蛋白;小鼠;抗体;生物信息学 R332 中图分类号: Bioinformatics of mouse uteroglobin binding protein and its polyclonal antibody preparation 1,2 1 1 1 1 1,* LI Chen , LIU Wei , HAN Jian-Zhong , FENG Dan-Dan , LIU Hui-Jun , LUO Zi-Qiang 1 2 Department of Physiology, Xiangya School of Medicine, Central South University, Changsha 410078, China; Department of Physi- ology, Changzhi Medical College, Changzhi 046000, China Abstract: To prepare anti-mouse uteroglobin binding protein mUGBP polyclonal antibody, two polypeptides were synthesized based on the bioinformatics analysis of mUGBP, and New Zealand white rabbits were immunized separately with each peptide cou- pled with keyhole limpet hemocyanin KLH. The data indicate that a 13-amino acid polypeptide positions 221st?233rd was able to 8 generate anti-peptide antibodies. The titer of the antisera detected with ELISA was 1:10The antisera were then purified with immuno- affinity chromatography to obtain antibodies. Western blot analysis of mUGBP expressed as a fusion prot