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细菌人工染色体（BAC）测序流程的优化 Eliane Escher 是瑞士苏黎世大学分子生物学研究所测序中心的管理者。这个研究小组每月常规进 行 1500 到2000 个测序反应，以质粒、PCR 产物和细菌人工染色体（BAC ）DNA 作为循环测序的模板。 Escher 女士利用BigDye® Terminator 循环测序试剂盒、GeneAmp® 9700 PCR 系统和3730 DNA 测序 仪，以一种改进的方法*对 BAC DNA 进行测序。此外，Escher 女士的研究小组发现利用 BigDye® XTerminator™纯化试剂盒进行反应纯化，能增加信号强度，并从整体上改善序列数据的读取质量，产 生与质粒模板相当的结果。 关于细菌人工染色体（BAC ） 美国应用生物系统公司的 3730 DNA 测序仪进行 毛细管电泳分析。同时平行分析质粒模板作为对 一般说来，细菌人工染色体（BAC ）DNA 的 照。11 个独立样品的分析数据显示与初始步骤相 测序比质粒或PCR 产物的测序要困难得多。它片 比，结果有了很大改善。 段长（一般大于100 Kb），会形成二级结构，可能 由于二级结构区域后的DNA 链延伸不够充分而导 更高质量的BAC 序列数据 致测序异常。BAC 测序需要毫克级高纯度的DNA， 女士发现，用BigDye T Escher erminator v3.1 从而获得充足信号，以利于准确的碱基信号检出和 循环测序试剂盒及改良的步骤，使BAC DNA的测 最大读长。 序质量达到甚至超过质粒测序中所得到的结果。在 细菌人工染色体（BAC）测序流程的优化 测序流程中加入BigDye XTerminator纯化试剂盒， 能极大改善大型细菌人工染色体 DNA样品测序所 Escher 女士所在测序中心的工作量很大，他 Sephadex 纯化相比 BigDye 面临的挑战。与 ， 们需要一种省时又经济的测序方法来对细菌人工 XTerminator纯化试剂盒纯化的BAC序列数据的信 染色体（BAC）样品进行常规分析。从过夜培养的 号强度显著得到改善。根据Escher女士的实验结 细菌培养物中纯化细菌人工染色体（BAC） DNA ， 果，在BAC测序中使用BigDye XTerminator纯化试 然后用 BigDye Terminator v3.1 循环测序试剂盒 剂盒可稳定地去除染料污染，从而消除了干扰序列 9700 PCR 系统上进行测序。 在GeneAmp Escher 分析的假象。关于Escher女士使用的操作步骤，请 女士最初使用的步骤是针对质粒和PCR 产物测序