Χ干扰素在反相高效液相色谱柱上色谱行为与分离的研究Ξ.pdfVIP

第 卷第 期 色 谱 年 月 Χ干扰素在反相高效液相色谱柱上色谱行为与分离的研究Ξ 康 建 刘亚革 孟璐露 孙亦红 沈阳军区总医院 沈阳 提 要 用高效液相色谱法对基因工程下游包涵体所含目标蛋白进行分离纯化 较系统地研究了 干扰素在 Χ 反相柱上的色谱行为及其影响因素 结果表明 复性后 干扰素伴有错配聚合体产生 其保留行为及洗脱谱图 ∀ Χ 随构象不同而改变 分离系统的疏水性和粘度是影响 干扰素在固定相与流动相间传质扩散的重要因素 ∀ Χ ∀ 关键词 反相高效液相色谱法 干扰素 包涵体 分类号 解后离心取上清液∀经 色谱分析后 前言 的Χ 粗品分别以变性或复性后样品过 Λ 真核细胞蛋白在原核细胞中表达 其产物常以 滤膜Λ上样∀ 包涵体形式存在∀ 由于包涵体所含目标蛋白的种类 实验结果 与其理化性质差异很大因此对包涵体蛋白的分离 - 纯化类似于膜蛋白 多以经验法进行摸索 本文以 的紫外吸收光谱与定性 粗提样品在 ∀ Χ ΙΦΝ 包涵体混合蛋白中的Χ干扰素 为纯化目标 上述洗脱条件下于波长∗ 范围内有较强 Χ 蛋白对变性或复性状态下的Χ 在反相柱上的 的紫外吸收∀ 不同波长下梯度洗脱实验中Χ 的 色谱行为及分离条件进行了研究 以期用一维色谱 色谱图如图 所示 鉴于多肽在波长 处灵敏 ∀ 数据辅以免疫化学等指标分析 构象信息 探 度较高 随后实验均选用该波长 用盐酸胍和谷胱甘 ∀ Χ 索适宜的色谱条件