盐湖土壤微生物总DNA提取方法的比较.pdfVIP

浙江农业学报ActaAgricuhuraeZhejiangensis，2012，24(6)：1086—1090 http：／／www．zjnyxb．an 苗莉云，张鹏．盐湖土壤微生物总DNA提取方法的比较[J]．浙江农业学报，2012，24(6)：1086—1090． 盐湖土壤微生物总DNA提取方法的比较 苗莉云 ，张 鹏 ’ (运城学院生命科学系，山西运城044000；湖北省农业科学院经济作物研究所，湖北武汉430064) 摘 要：为了构建运城盐湖土壤微生物宏基因组文库 ，文章对盐湖土壤微生物总 DNA的提取方法进行了比 较和探索，通过改良6种植物DNA的提取方法，分别提取了盐湖土壤微生物总 DNA，并采用紫外分光光度 法、凝胶电泳、内切酶分析和PCR扩增法检测了各个方法所提取的DNA样品的质量。结果表明：改良后的方 法3是较适合提取运城盐湖土壤微生物总DNA的方法。采用该方法所得DNA的OD 。值为 1．883，DNA 浓度和得率分别为 18．1ng·tzL 和72．4ng·g～；DNA片段长度约为23kh，琼脂糖凝胶电泳条带清晰，无 降解；DNA能被EcoRI完全酶切，并可用于PCR扩增分析。 ． 关键词：盐湖土壤 ；微生物；宏基因组；总DNA；提取方法 中图分类号：S154．3 文献标志码：A 文章编号：1004—1524(2012)06—1086-05 Comparison ofthemodifiedmetagenomicDNA extractionmethodsofmicroorganismsfrom saltlakesoils MIAO Li—yun ，ZHANG Pengt (DepartmentofLfieScience，YunchengC e ，Yuncheng044000，China；InstituteofIndustrialCrops，Hubei AcademyofAgriculturalSciences，Wuhan430064，China) Abstract：Inordertoconstructthemetagenomiclibraryofmicroorganismsfrom saltlakesoilsinYuncheng，themi— crobialmetagenomicDNA extractionmethodwasexplored．SixofplantgenomicDNAextractionmethodsweremodi— fledtoextractthemicrobialmetagenomicDNA．Theyieldandquali~ ofthemetagenomicDNA wasdetectedbyultra- violetspectrophotometry，gelelectrophoresis，restrictionendonucleaseanalysisandPCR amplification，andthere- sultsshowedthatthemodifiedmethod3 wassuitableforextractingthemicrobialmetagenomicDNA from saltlake soilsinYuncheng．ForthemicrobialmetagenomicDNA extractedbythemodifiedmethod3，thevalueofOD26J【／28o was1．883，theconcentrationandyieldwas18．1ng · L～ and72．4ng ·g～ respectively，andthelengthwasa— bout23kbwithaclearstripeontheagarosege1．Moreover，htemetagenomieDNA wascompletelydigestedwith EcoRIandalsocouldbeusedofrPCRamplification． Keywords：saltlakesoil；microorganisms；metagenome；metagenomicDNA ；extractionmethod 极端微生物是在极端环境下能够正