乳铁蛋白及其活性多肽研究进展.pdfVIP

铁蛋白及其活性多肽研究进展 从动植物的天然产品中寻找耐热活性因子，是饲料科学一个新兴的研究方向。家畜乳中含有 多种具抗菌作用的蛋白质分子，对母畜的自身免疫及维持初生仔畜的胃肠道健康起重要作用。 乳铁蛋白（fortoferrin，简写为LF）是Groves 于 1960 年首先 牛乳中分离获得，由于乳 铁蛋白与铁结合形成红色的复合物，故始称红蛋白。1961年Blanc 和Isliker 将他们 人乳 中分离出来的此种蛋白命名为乳铁蛋白。另有学者根据乳铁蛋白转运铁的功能将其称为乳转 铁蛋白（betobosfer．Rin）LfcinB 是牛乳铁蛋白在消化道正常生理条件下释放出的一种含 25 个氨基酸残基的抗菌肽，在水溶液中呈亲水脂的两个反向β折叠结构，具有耐热、在消化 道中不易降解、无抗原性、免疫调节作用、广谱抑菌和对肠道有益菌无害等特性，是研究抗 菌肽结构——功能关系的理想对象。 1 铁蛋白的生物功能 乳铁蛋白是一种分子量为70～80KDa 的铁结合蛋白，由一条多肽链构成，其多肽链分子上附 有两条碳水化合物侧链。其碳水化合物含量约为 7％，其组成有甘露糖、半乳糖等。每个分 子上有两个铁结合位点。在牛的初乳及干乳期乳腺分泌物中含量丰富，初乳中含量为 0．6g ／mL。此外动物体的外分泌物中如泪液、 液、滑膜液及嗜中性白细胞颗粒中也有乳铁蛋白 存在。乳铁蛋白主要由乳腺上皮细胞合成，少量来自多形核白细胞。它与血清转铁蛋白 （transferrin）在化学性质、抗菌特性等方面相似，但二者在氨基酸组成、抗原性和免疫作 用方面存在很大差别。乳铁蛋白具有广泛的生物学功能，如调节铁离子的吸收；参与某些炎 症反应和对机体免疫系统进行调节，有广谱抗菌作用；还具有抗病毒，调节补体系统，促进 细胞增殖等作用。 2 乳铁蛋白活性多肽的发现及结构 乳铁蛋白最重要的生理功能就是其优异的广谱抗菌性，近年来人们通过对乳铁蛋白的大量临 床研究已经充分证明了这一点。家畜乳中各种蛋白质在哺乳仔畜的消化道中要经过非常复杂 的降解过程，甚至在乳腺组织中部分蛋白质就会被蛋白水解酶如纤溶酶（Plosndn）作用而发 生部分水解。随着研究的深入，人们发现乳铁蛋白在水解后会产生某些具有特殊生理功能的 小肽——活性多肽，它的抑菌效果是乳铁蛋白的400 倍。Kuwa－ta 等 （1998）发现这种活性 多肽是含25 个氨基酸残基的抗菌肽，这表明Lfcinb 是动物消化道正常生理条件下释放出的， 一些学者认为LfcinB 是某种抑菌成分的前体物质。Suzuki 等 （1989）研究表明，用胃蛋白 酶或胰蛋白酶处理乳铁蛋白，尽管很容易破坏乳铁蛋白的铁结合能力和抗原性，但却不能消 除乳铁蛋白的抗菌活性。这说明乳铁蛋白的某些酶解片段仍然具有活性，并有可能在幼畜胃 肠消化道中继续发挥其抗菌作用。Toinita 等 （1990）研究了牛乳中乳铁蛋白经蛋白酶水解 后活性多肽的抑菌性能，发现经猪胰蛋白酶作用水解得到的小分子多肽具有广谱的抑菌效能， 可以抑制一些革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌的生长，水解多肽的抑菌活性明显高于乳铁蛋白。 向活性多肽中添加 Fe3+其抑菌活性并不会降低，这一点与乳铁蛋白的抑菌表现完全木同。 Saifo 等 （1991）研究发现，乳铁蛋白在pH=4．0 酸性条件下对热处理具有较强的耐受力， 但在pH＝2．0 时热处理，则会导致乳铁蛋白发生不同程度的水解，水解率达 10％时的产物 (120℃水解 15 min）在10μg ／mL 浓度条件下，表现出比未经酸热处理的乳铁蛋白更强的抗 菌活性。具有抗菌活性的乳铁蛋白水解产物木具有结合铁离子的能力，并且比天然乳铁蛋白 的抗原性低，但在富含铁离子的培养基中仍可保持抗菌活性，表明它具有与乳铁蛋白不同的 抗菌机制。用反相高效液相色谱分离该水解产物，发现了分子量约为5000 道尔顿的具有极强 抗菌活性的小肽，它的抗菌机制与乳铁蛋白的不同之处在于其抗菌活性与铁离子螫合物无关， 而推测在乳铁蛋白上有一些抗菌位点，这些位点存在于乳铁蛋白的活性多肽上，并在乳铁 蛋白发生部分水解时被激活，显示出很强的抗菌作用。 Bellmp 乳铁蛋白分子的N 末端进行分离，分别得到了人乳和牛乳乳铁蛋白的活性多肽，并 分别命名为 betoferricin H （简称Lfcin H）和 forto．fetricinB （简称 Lfcin B）。 LfcinB 的相对分子量为3100 道尔顿左右，由25 个氨基酸残基组成，其氨基酸序列如下： Phe－ Lys － Cgs－ Arg－Ars 一 Gin－Trp－Arg－Met－Lys－Lys