AtDREB2B基因的克隆及植物表达载体的构建.pdfVIP

安徽农业科学,Journal of Anhui Agri . Sci .2008 ,36(21) :8943 - 8945 责任编辑 刘月娟 责任校对 马君叶 At DREB2B 基因的克隆及植物表达载体的构建 1 1 2 1 * 王天祥 , 严晓丹 , 贾文锁 , 王华芳 ( 1. 北京林业大学生物科学与技术学院, 北京 100083 ;2 . 中国农业大学农学与生物技术学院, 北京 100094) 摘要 [ 目的] 获得耐旱转录因子的植物表达载体, 进 而转化 植物获得 耐旱 性提 高的新植 物株 系。[ 方法] 提 取脱 水处 理的拟南芥 总 RNA , 利用 At DREB2 B 特异 引物通过RT- PCR 扩增 出1 .2 kb 片段, 并将其 克隆至pBS- T 上, 测序 。[ 结果] 序列 分析 表 明, 该克 隆序 列与 GenBank 上登 录 At DREB2 B 基 因序列的一致性为100 % 。进一步通过片段 的亚克隆, 将其构建至植物表达载体pCAMBIA 1301 和pBin438 上, 分别由rd29A 启动子和重复35 S 启动子调控基 因表达。[ 结论] 成功构建 了2 种At DREB2 B 的植物表达载体, 并通过冻融法转化根癌 农杆菌 GV3101 , 为农杆菌介导的 At DREB2 B 基 因对植物的遗传转化奠定基础 。 关键词 DREB2 B ; 载体构建; 基 因克隆; 不完全酶切 中图分类号 S188 文献标识码 A 文章编号 0517 - 6611(2008) 21 - 08943 - 03 Gene Cloning of At DREB2B and Constructtion of Its Plant Expression Vectors WANG Tian-xiang et al ( College of Biological Sciences and Biotechnology of Beij ing Forestry University ,Beij ing 100083) Abstract [ Obj ective] The research ai med to obtain the plant drought-resistant transcription factor and its expressionvector ,then the new plant strains of drought- resistant plants .[ Method] Total RNA was obtained fromdehydrated Arabi dopsi s .And the At DREB2 B special pri mers were used to amplify 1 .2 kb frag ment by RT- PCR .This 1 .2 kb fragment was inserted into pBS- T and sequenced .[ Result ] Sequence analysis showed that the sequence cloned in this experi ment had a si milarity of 100 % with At DREB2 B gene logged on GenBank .Furthermore the subcloned frag ment was inserted into plant expression vec- tors pCAMBI A1301 and pBin438 b ,which were expressed by rd29A promoter and repeated 35 S promoter regulated gene separately .[ Conclusion] 2 plant expression vectors of At DREB2 B was constructed successfully .And a basic way for using Agrobact eriu m me