DNA粗提取与鉴定实验的改进.pdfVIP

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2切片技术与改进 造成困难,凝固性差,使得材料易收缩变形。改用包埋前, 2.1常规切片的程序是,经过修整的石蜡块粘到台木 事先备好一磁盆清水,上面垫一块玻璃板,包埋在玻璃板 上,即可切片。但在华南地区,由于夏季气温高,蜡片 上完成,用物理变化使包埋温度降低,使纸盒底层石蜡溶 易变软,较难切得完整、连续。在切片的前一天,将修 液凝固加快,这时放人的材料稳定性提高,即使是植物的 整好的石蜡块粘在台木一同浸入装满清水的烧杯中. 药粉、柱头等都可以顺利包埋,可随时粘台木、修块、切片。 然后放人冰箱贮藏室中过一夜,通过物理降温,提高了 4贴片技术的改进 蜡块的硬度,使得切出来的蜡带连续,材料完整,而且 常规的贴片程序是将切好的蜡带放到切片板上, 克服了常规切片中出现粘刀、材料破碎等现象。 在常温下进行贴片、展片。由于夏季温度高,刚切成的 2.2常规程序是切片刀磨好后,擦净油迹,装刀上机 蜡带放到切片板上后很快就粘性变软,给后期操作带 即可切片,常因刀刃粗糙,切片时蜡带有刀痕及裂痕与 来困难。改进将切好的蜡带放到切片板快速放进冰箱 材料分离,导致材料破碎,并有粘刀现象,最终无法得 贮藏室内半个小时,再取出来进行展片、贴片,其结果 到理想的连续切片。如将磨好的刀片擦净油迹再用绸 是蜡带不起皱、硬度适中、不粘连,操作简便,材料无损 布蘸上爽身粉(婴儿爽身粉更佳),轻轻擦拭均匀,然后 伤。既科学又方便,比常规贴片效果理想。 在荡刀皮上涂上一层爽身粉.来回运动几分钟可获得 5小结 理想的切片效果。蜡带光滑连续、不粘刀、刀刃不起铁 在常规制片的基础上,改进取材、切片、贴片泡埋等 削,蜡带无裂痕.无需经常更换刀片,效果理想。 操作程序,克服常规操作中的不足。因此,即使高于常温 3包埋技术与处理 的环境下,也可以制作出理想的植物石蜡永久切片。由于 在炎热的气候里,夏季温度有时可达35℃,按常规包 摸索出这一简便快捷,易于操作,省时、省力的方法,给夏 埋就有一定的困难,石蜡凝固慢,给一些嫩小材料的包埋 季制片奠定了基础。 DNA粗提取与鉴定实验的改进 张雪玲(湖南省浏阳市教育局教研室410300) 高中生物新教材中《DNA粗取与鉴定实验》是遗传变 (4)以4:l(V/V)加入5 mol/L高氯酸钠,再加入 异一章中一个很重要的实验,同时也是本教材的重难实 等体积的氯仿一异戊醇(24:1v/v),剧烈摇晃30s。 000 验。通常教材上的实验取材是鸡的血液,由于现在学校班 离心:4 r/商n,5min。 级和人数都很多,实验材料很难满足学生的需要,并且鸡 (5)取离心后的上层DNA水溶液于烧杯中,加入 血很容易变质,同时实验过程也较复杂,所以学校通常不 2倍95%的预冷乙醇,并用竹签轻轻向一个方向搅动, 做,即使有的学校试着做,成功的几率也很小。下面介绍 此时DNA以纤维沉睫缠绕在竹签上。若DNA不能形 另外几种方法供参考: 成或不完全形成纤维沉淀时,可采用离心法收集DNA 方法一、从植物组织细胞中提取DNA: 絮状物。 (1)取50 g玉米幼苗或豆类幼苗洗净去水,剪碎 (6)取少许纤维沉淀或是絮状物加入二苯胺(沸水 放人研钵中,加人等量的(w/V)的研磨缓冲液 (O.1 nlol/L氯化钠~O.05mo】/L柠檬酸钠缓冲液,调 呈绿色)。 至pH为7.o),快速碾磨成浆状物。 方法二: (2)将

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