提高蛋白质在米曲霉中表达量策略.pdfVIP

中国生物工程杂志　ＣｈｉｎａＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，２００９，２９（１）：１１１～１１５ 提高蛋白质在米曲霉中表达量的策略 张建军　蔡容华　李　强　施碧红 （福建师范大学工业微生物教育部工程研究中心 福建师范大学生命科学学院　福州　３５０１０８） 摘要　米曲霉是一种重要的微生物，在食品、酿造、商业酶和医用蛋白的生产中具有广泛的应用， 该菌被美国食品与药品管理局（ＦＤＡ）认定为ＧＲＡＳ（ｇｅｎｅｒａｌｌｙｒｅｇａｒｄｅｄａｓｓａｆｅ）级。讨论了提高同 源和异源蛋白在米曲霉中表达量的几种策略，包括使用强启动子、多拷贝编码基因、优化培养基 和超表达血红素结构域（ＨＢＤ）等。异源蛋白容易被米曲霉蛋白酶降解，表达量往往较低，因此使 用蛋白酶缺陷型宿主菌是非常必要的。另外将外源蛋白与米曲霉高分泌蛋白融合表达也是提高 异源蛋白产量的有效途径。 关键词　米曲霉　蛋白质　同源表达　异源表达　蛋白酶缺陷型 中图分类号　Ｑ７８９ ［５］ 　　米曲霉（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓｏｒｙｚａｅ）是一种丝状真菌，在发 和基础生物研究的应用更加广泛 。 酵工业中具有重要的作用，在米酒、酱油、豆面酱、商业 １　同源蛋白在米曲霉中的表达 酶以及医用蛋白的生产中都有广泛的应用。米曲霉被 用来制曲，这些曲可以提供发酵过程中所需的多种水 　　实现真菌来源的蛋白在米曲霉中高效表达最常用 解酶和营养成分。米曲霉在食品工业中有着上千年的 方式就是使用强的、组成型的或者是可调节的启动子， 安全应用历史，美国食品与药品管理局（ＦＤＡ）认为米 亦或是构建含有多拷贝基因的菌株。构建多拷贝基因 曲霉是一种安全的生物（ＧＲＡＳ级），最近又认为该微生 的菌株可以用携带多拷贝基因的粘粒或者是选取合适 ［１］ 物可以作为一种很有前途的宿主菌生产重组酶 。 的选择标记，进行多次的载体整合。使用这样的表达 　　丝状真菌表达系统比其它表达系统具有许多优 系统可使大多数的真菌蛋白产量提高１０～２０倍，摇瓶 点，所以对于丝状真菌的开发就很具有吸引力。这些 培养可达到１～２ｇ／Ｌ的水平。通过一些超表达的研究 优点包括：（１）具有产生和分泌大量蛋白的能力；（２）细 报告，可以发现限制同源蛋白高效表达的主要瓶颈是 ［６］ 菌和酵母有时不能表达某些蛋白，特别是翻译后需要 在转录水平 。 进行糖基化和二硫键形成的真菌蛋白，而丝状真菌被 　　获得最大的酶产量是任何生物工艺学的重要目标 发现可以产生正确折叠并且具有功能的此类蛋白；（３） 之一，常用几种策略包括菌株优化、培养基优化、生物 几种包含丝状真菌的产品获得 ＧＲＡＳ认证，即达到食 过程优化、数学建模等。在进行工业发酵时，培养基优 品级应用级别；（４）可以筛选到稳定的重组子，这样就 化是最重要的。代谢物的浓度和霉菌的生长都受到培 ［２］ 可以进行可控性育种 。 养基组成成分的很大影响，这些成分包括碳源、氮源以 ［３］ ［７］ 　　随着遗传操作技术在米曲霉中的应用 ，再加上 及无机盐等 。对于以米曲霉为宿主的工程菌而言， 米曲霉无病源性，培养方法成熟以及具有分泌大量蛋 很多策略已经成功运用到提高蛋白产量的研究或生产 白到培养基中的能力，米曲霉普遍被认为是表达异源 当中。 蛋白的理想菌株。另外来源于米曲霉表达序列标签 １．