基于小鼠MMP-9siRNA.pdfVIP

中国细胞生物学学报 Chinese Journal of Cell Biology 2012, 34(9): 906–910 http ://www.cj MMP-9 siRNA 基于小鼠 基因的 的筛选 1# 2# 1 1* 唐照勇 　刘　阳 　刘隆兴　方廖琼 (1西南大学生物技术学院, 重庆400716; 2兰州军区疾病预防与控制中心, 兰州 730000) GenBank MMP-9 siRNA 摘要 通过 数据库检索, 基于小鼠 基因设计特异性的 干扰靶点, 克隆 pGCsi-U6/Neo/GFP PEI B16 至 载体中, 使用 衍生物包裹, 转染小鼠黑色素瘤 细胞, 流式细胞仪和激光 RT-PCR 24 48 h MMP-9 扫描共聚焦显微镜分析细胞转染情况, 检测 , 后 基因转录水平变化, 筛选最佳 3 MMP-9-siRNA 3 的重组质粒和干扰靶点。结果显示: 成功设计和构建了 个 干扰质粒, 个重组质粒 B16 60.04% 63.93% 56.27% 3 B16 MMP- 对 细胞的转染率分别为 、 和 , 且 个重组质粒均能有效干扰 细胞 9 mRNA 的表达, 其中MMP-9-siRNA-2干扰效率最高(63%), 可持续干扰MMP-9基因表达。这些结 果提示, MMP-9-siRNA-2为沉默小鼠黑色素瘤细胞MMP-9基因最优的siRNA重组质粒。 关键词 MMP-9; B 16细胞; siRNA; RT-PCR 肿瘤的侵袭和转移是肿瘤患者死亡的主要原 Kit I(Omega公司, 美国); GenEscortII基因转染试剂 因, 而恶性肿瘤发生侵袭和转移早期的重要事件就 (南京慧基生物技术有限公司); RPMI-1640 、胎牛血 (extra cellular matrix, ECM) Hyclone B16 是对细胞外基质 的降解。 清和胰蛋白酶购自 公司; 小鼠黑色素瘤 基质金属蛋白酶(matrix metallo-proteinase, MMPs)是一 细胞购自中国科学院典型培养物保藏委员会细胞 类能够有效降解基底膜和ECM 的蛋白家族, MMP-9 库。 MMPs B 作为 家族的主要成员, 也叫明胶酶 , 是一个 1.2 siRNA重组质粒的设计与构建 分子量为92 kDa 的蛋白, 它能降解ECM 的主要成分 MMP-9 在GenBank 中搜索小鼠 mRNA序列, 寻 IV型胶原酶, 破坏肿瘤周围的基质和基底膜屏障, 刺 找合适的靶位点, 用上海吉凯基因化学技术有限公 激肿瘤细胞穿过胞外基质进行侵袭和转移[1-2], 甚至 司siRNA设计软件设计并合成相应的siRNA序列, 参与调节肿瘤血管发生