庞大而复杂的技术体系。基因操作已成为医学研究的重要手.pptVIP

Northern blot印迹杂交是指待测RNA样品经电泳分离后转移到固定支持物上，然后与标记的核酸探针进行固-液相杂交。原理同Southern blot。 但因Northern blot印迹杂交法检测的是RNA，在外界环境中极易被环境中的RNA酶所降解，因此制备RNA样品时，所需器皿均需要特殊处理。同时作为监测细胞内RNA含量不够准确，只能作为定性分析RNA方法。 （一）Northern blot定性分析RNA的常用方法 RT-PCR是一种以mRNA为模板的体外扩增cDNA的技术。其基本程序是：提取细胞总RNA，然后将其中的mRNA在体外逆转录成cDNA，再以cDNA为模板，进行特定基因的PCR扩增。因为PCR扩增产物有平台效应，故RT-PCR也一般用于RNA的定性分析。 但如果将阳性参照基因作为内参照与待测RNA在一个反应体系中进行扩增，可以对RNA进行相对定量分析。参照基因： β -肌动蛋白（β-actin）、3-磷酸甘油醛脱氢酶、rRNA基因等。 （二）RT-PCR用于定性、定量分析RNA方法 三、RNA酶保护试验—了解基因转录后的选择性剪接 RNA酶保护试验是利用Rnase A和Rnase T1能专一的降解单链RNA而双链RNA受到保护的特性，用体外转录合成的放射性核素标记的RNA探