尿液中大肠埃希菌实时荧光定量聚合酶链反应检测方法的建立.pdfVIP

检验医学2011年6月第26卷第6期 LaboratoryMedicine，June2011,ol ． 文章编号：1673~640(2011)06~368-04 中图分类号 ：R446．5 文献标志码 ：A 尿液中大肠埃希菌实时荧光定量 聚合酶链反应检测方法的建立 吴 蓉 ， 张 隆 ， 华 玲 ， 戴俊华 ， 刘丽丽 ， 康向东 (1．上海中医药大学附属普陀医院检验科 ，上海 200062； 2．上海市浦东新区公利医院检验科 ，上海 200135) 摘要：目的 建立实时荧光定量聚合酶链反应(RQ—PCR)检测大肠埃希菌的方法，检测泌尿道感染患者尿 液样本，评估应用RQ．PCR法在检测大肠埃希菌尿路感染的意义。方法 选择大肠埃希菌B一右旋半乳糖苷酶基 因作为检测靶基因设计引物，建立SYBRGREENIRQ—PCR检测体系。结果 引物特异性好，标准曲线相关系数 在0．990～0．996之间。熔解曲线显示产物特异性较强，无非 目的条带和二聚体产生。在最低检测限(10拷贝／ )以上，能对大肠埃希菌样本进行检测，且重复性好。结论 RQ—PCR是一种快速、敏感、特异、重复性好的定 量检测大肠埃希菌质粒 DNA方法，可用于定量检测临床患者尿液样本中大肠埃希菌含量。 关键词：大肠埃希菌；DNA；质粒；尿液；实时定量聚合酶链反应 The establishment of real-time fluorescentquantitation polymerase chain reaction for detection of Escherichiacoliinurine WURong ，ZHANGLong ，HUA Ling2， DAIJunhua，LIULili，KANGXiangdong． (1． DepartmentofClinicalLaboratory，PutuoHospitalAffiliatedtoShanghaiUniversityofTraditionalChineseMedicine， Shanghai200062，China；2．DepartmentofClinicalLaboratory，ShanghaiPudongGongliHospital，Shanghai200135， China) Abstract：0bjective ToestablishamethodfordetectingEscherichiacoliinurineofpatientswithurinarytract infectionbyreal—timefluorescentquantitationpolymerasechainreaction(RQ—PCR)andevaluatethesignificanceofthis method．Methods EscherichiacoliG-D—galactosidasegenewasusedtodesignprimersforRQ-PCR．SYBRGREENI WaSusedinRQ—PCR．Results ThespecificityofprimerWBSgood，andthecorrelationcoefficientofstandardcuYvewas 0．990-0．996．Melt-CHIve analysis showed thatthe pfimem were specific，nad no nonspecific products such as nonspecificbandsandprimer—dimerswereproduced．Escherichia colicould bedetectedwhen theminimum detection limitofEscherichiacoliwasabove10 copies／~L．Therepeatbailitywasgood．Conclusions RQ—PCR isafast， sensitiveandspecificmethodwithgoodrepeatabilitytoexam