复合与合成培养基对大肠杆菌胞外生产α环糊精葡萄糖基转移酶的影响.pdfVIP

中国生物工程杂志　ＣｈｉｎａＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，２０１０，３０（９）：３６４２ ? 复合与合成培养基对大肠杆菌胞外生产 α环糊精葡萄糖基转移酶的影响 １，２ １，２ １，２ １，２ １，２ 程　婧 　吴　丹 　陈　晟 　吴　敬 　陈　坚 （１江南大学 食品科学与技术国家重点实验室　无锡　２１４１２２） （２江南大学生物工程学院工业生物技术教育部重点实验室　无锡　２１４１２２） 摘要　为实现来源于ＰａｅｎｉｂａｃｉｌｌｕｓｍａｃｅｒａｎｓＪＦＢ０５０１的 环糊精葡萄糖基转移酶（ＣＧＴ酶）的 α α 高效胞外表达，以含分泌型信号肽ＯｍｐＡ的大肠杆菌Ｅ．ｃｏｌｉＢＬ２１（ＤＥ３）｛ｐＥＴ２０ｂ（＋）／ｃｇｔ｝为 α 研究对象，比较了其在不同诱导条件下复合与合成培养基中生长产酶的规律。结果表明在添加 甘氨酸的条件下采用合成培养基，以０．８ｇ／Ｌ／ｈ的乳糖进行流加诱导所得的胞外酶活和生产强度 最高。在该条件下发酵 ３０小时后胞外 ＣＧＴ酶的环化活性达 １１３．０Ｕ／ｍｌ（水解活性为 α ７９１００．０ＩＵ／ｍｌ），是复合培养基胞外产酶的２．３倍，完全满足工业化生产的需求。 关键词　Ｐａｅｎｉｂａｃｉｌｌｕｓｍａｃｅｒａｎｓ　 环糊精葡萄糖基转移酶胞外生产　大肠杆菌　合成培养基 α 中图分类号　Ｑ８１５ 　　环糊精葡萄糖基转移酶（简称 ＣＧＴ酶，ＥＣ２．４．１． 供菌体生长产酶必须的各种生长因子和维生素，细胞 １９）是糖基水解酶 淀粉酶家族（家族 １３）的重要成 可以快速生长，但较难进行高密度发酵。如陈车生 α 员，它能将淀粉通过环化反应转化为环糊精（简称 等［８］采用复合培养基高密度发酵生产重组人锰超氧化 ［１］ ［９］ ＣＤ） 。环糊精能与许多客体分子形成包合物，从而改 物歧化酶时，ＯＤ 最高为２８．９８；杜丽琴等 采用复合 ６００ 变它们的物理和化学性质，在食品、医药、农业、纺织、 培养基高密度发酵生产甘油时，ＯＤ 最高为３０．９６。 ６００ ［２４］ 合成培养基以无机盐为主要成分，适合分批补料的高 环保和分析化学等领域具有广泛的应用 。由于 ＣＧＴ酶的大规模制备是环糊精酶法生产的关键技术， 密度的发酵，但发酵过程多变，蛋白质表达水平也不尽 ［１］ ［１０］ 因此大幅度提高ＣＧＴ酶产量是关键 。目前国内外关 人意。如李民 报道Ａｌｌｅｎ等曾采用合成培养基培养 于ＣＧＴ酶的发酵优化主要集中在野生菌和重组大肠杆 重组大肠杆菌时，菌体在很短时间（１３ｈ）达到了７９ｇ 菌，但是野生菌产酶水平低，而大肠杆菌蛋白分泌难以 （ＤＣＷ）／Ｌ，但外源基因却不表达。实际上，外源基因 调控以及易形成包涵体等缺点导致ＣＧＴ酶产量也普遍 表达受多重因素的限制，除了与底物浓