Bβ448野生型及突变型纤维蛋白原稳定转染细胞系的建立.pdfVIP

2012芷 4月 首 都 医 科 大 学 学 报 Apr．2012 第33卷 第2期 JournalofCapitalMedicalUniversity VoL33 No．2 [doi：10．3969／j．issn．1006-7795．2012．02．011] ·基 础 研 究 · Bfl448野生型及突变型纤维蛋白原稳定转染细胞系的建立 林 媛 ， 李积凤 ， 刘 杰 ， 牛梦林 孙 然 王 军 ， 刘 岩 ， 王 辰 ， (1．首都医科大学附属北京朝阳医院呼吸与危重症医学科，北京市呼吸和肺循环疾病重点实验室，北京呼吸疾病研究所 ，北京 100020；2．首都医科大学基础医学院生理学教研室，北京 100069；3．卫生部北京医院，北京 100730；4．首都医科大学附属北京 朝阳医院心外科 ，北京 100020) 摘【要】 目的 构建野生型(BC14rg448)和突变型(BflLys448)纤维蛋白原稳定表达细胞系，为进一步研究BflArg448Lys基因多态 性的病理生理学意义及相关蛋白功能研究提供实验基础。方法 以含纤维蛋 白原野生型 BB链 eDNA全长的表达载体 pMLP． FGB(448G)为模板 ，采用PCR定点突变技术构建B~Lys448表达载体，即突变型质粒pMLP—FGB(448A)。应用脂质体转染及药物 加压筛选的方法，将纤维蛋白原 Act链、野生型／突变型 BB链、 链表达载体共同转染至 CHO—K1细胞 ，RT．PCR检测各条链 mRNA的表达。结果 野生型及突变型纤维蛋白原稳定转染细胞系在转录水平构建成功。结论 野生型及突变型纤维蛋白原 稳定转染细胞等在转录水平构建成功，为进一步体外研究BffArg448Lys所致纤维蛋白原的结构与功能异常奠定了基础。 【关键词】 纤维蛋白原；定点突变；稳定转染细胞系 【中图分类号】 Q782 EstablishmentofstablytransfectedcelllineexpressingBflArg448orBl2l s448 fibrinogen LINYuan’，LIJi—feng，，LIUJie’，NIU Meng．1in ，SUNRan ，WANGJun’，LIU Yan， ，WANG Chen，。 (1．DepartmentofRespiratoryandCriticalCare，BeijingChaoyangHospital，CapitalMedicalUniversity，BejiingKeyLaboratoryof RespiratoryandPulmonaryCirculation，BeijingInstituteofRespiratoryMedicine，Be·ng100020，China；2．DepartmentofPhysiology， SchoolofBasicMedcialSciences，CapitalMedcialUniversity，Beifing100069，China；3．BeringHospital，Min~tryofHeahh，Betling 100730，China；4．DepartmentofCardiacSurgery，BeingChaoyangHospital，CapitalMedcialUnwemity， 100020，hCina) 【Abstract】 Objective ToinvestigatetheeffectofBlfflrg448Lyspolymorphismonthefunctionoffibfinogen，andtoestablishthestbaly transfectedcelllineexpressingfibfinogenwithBflArg448andBflLys448polymorphism．Methods MutantfibfinogenBBchaineDNA (BflLys448)pMLP-FGB(448A)wasgeneratedfromwildtypeS13chaineDNA(BflArg448)pMLP-FGB(448G)，whichcontainstheentire fibrinogenSl3chaineDNAusingsite—directedmutag