甜菜亚硝酸还原酶（NiR）基因的克隆与表达分析.pdfVIP

作物学报 ACTA AGRONOMICA SINICA 2011，37(8)：1406—1414 http：／／www．chinacrops．org／zwxb／ ISSN 0496—3490；CODEN TSHPA9 E—mail：xbzw@chinajourna1．net．cn Doh 10．3724／SP．J．1006．2011．01406 甜菜亚硝酸还原酶(NiR)基因的克隆与表达分析 石晓艳 曾彦达 李世龙 王玉波 马凤鸣 刁志伟 东北农业大学农学院，黑龙江哈尔滨 150030 摘 要：以甜菜品种甜研7号叶片的eDNA为模板，采用 RT-PCR和3／5RACE技术，获得了编码亚硝酸还原酶基因 (NiR)的cDNA全序列 2014bp，包含有 1830bp的开放阅读框，编码 599个氨基酸。所推导的氨基酸序列与菠菜及 拟南芥 NiR编码 的氨基酸序列均具 93％的同源性。生物信息学分析表明，甜菜 NiR具有完整的NiR蛋 白结构，含血 红素蛋白D一化合物区域和4Fe一4S区域，并利用分析软件预测其三维结构。实时荧光定量结果显示，在以0、10、20、 30、40、50、80和 160mmolL NO3--N处理72h的试验中，50mmolL-处理可使甜菜 NiR的表达量达到最大；以0、 2、4、8、16、32、64和 128mmolL NH4+-N处理48h的试验表明，8mmolL 和 64mmolL 处理条件下甜菜NiR 表达量相对较高。硝态氮和铵态氮不同配比处理 48h的试验中，NO3-N和NH4~-N比例为 80：20可使甜菜NiR的表 达量达到最大；在氮素诱导的基础上，蛋白抑制剂放线菌酮处理 9h，随着处理浓度的增大，NiR的表达量逐渐下降； 不同浓度 NOl2-处理 的试验中，40mmolL 处理下 NiR的表达量最大 。 关键词：甜菜；亚硝酸还原酶；eDNA；克隆；基因表达 M olecular Cloning and Characterization ofNitrite Reductase Gene from Sugarbeet SHIXiao．Yan，ZENG Yan—Da，LIShi．Long，WANG Yu．Bo，MA Feng—M ing ，andDIAO Zhi—W ei CollegeofAgriculture，NortheastAgriculturalUniversity,Harbin150030，China Abstract：Thenitritereductase(NiR)genewasclonedusing PCRand3／5RACEtechniques．ThecDNAofNiRgeneisolated from sugarbeetwas2014bpcontaininga1830bpopening—readingframe(OPa1)，encoding599aminoacids．Fu~hercomparison showedthatNiRgenehadhighhomologytobothofSpinaciaoleraceaNiRgeneandArabidopsisthalianaNiRgene，whichwas 93％．ThepredictedNiRproteinfoundtohaveahemoproteinbeta—component(ferrodoxin—like)，nad4Fe一4Sregion，its3Dstruc— turewaspredictedbyna alysissoftware．RealtimePCR analysisshowedhtatwhenusing0，10．20，30，40，50，80，na d160mmol L-NO3一N treatedf0r72hours，theexpressionofNiRgenewasthehighestat50mmolL-i；whenusing0，2，4，8，16，32，64 and ， 128mmolL_。NH4 N treatedfor48hours，hteexpressionofNiR geneshowedtwopeal(sat8mmolL na