镉胁迫下萝卜基因组DNA甲基化敏感扩增多态性分析.pdfVIP

维普资讯 植物生理与分子生物学学报，JournalofPlantPhysiologyandMolecualrBiology2007，33(3)：219—226 219 镉胁迫下萝 l、基因组DNA 甲基化敏感扩增多态性分析 杨金兰-，柳李旺-，龚义勤。，黄丹琼。，王峰。，何玲莉。 ·南京农业大学园艺学院，作物遗传与种质创新 国家重点实验室 南京 210095： 北达科他州立大学植物科学系，法戈，ND58105，USA 摘要：应用甲基化敏感扩增多态-I~(MSAP)技术分析了重 等 2004；Aina等 2004)。 金属镉 (cd)胁迫处理后萝 卜基因组DNA 甲基化程度的变 DNA甲基化调节植物基因的表达 ，从而影响生 化。结果表明，经50、250和500mg／LCdC1，处理后，MSAP 长发育的调控(Gonzalgo和 Jones1997)。植物 DNA 比率分别为 37％、43％和51％，均高于对照(34％)；全 甲 甲基化是一种普遍现象，但DNA甲基化水平因植物 基化率(双链CCGG)分别为23％、25％和27％，而其对 种类而异，大约 30％的核基因组DNA胞嘧啶处于 照为22％，表明重金属CdC1胁迫后，某些位点发生了重 新甲基化。萝 卜叶片DNA中总甲基化水平的增加与CdC12 甲基化状态 (Richards1997)。DNA中被 甲基化的碱 处理浓度呈显著正相关。甲基化变异可分为重新 甲基化、 基一般是 C (胞嘧啶)，主要是 5．甲基胞嘧啶(5mC) 去甲基化、不定类型以及与对照相同的甲基化模式等类 在 CPG或 CPNPG (N 为任意碱基)中形成 的 型，Cd胁迫处理引起的植株基因组DNA甲基化程度的提 (Gruenbaum等 1981)。 高主要是重新 甲基化。 甲基化敏感扩增多态性(methylation—sensitive 关键词：萝 卜；镉胁迫；DNA 甲基化；甲基化敏感扩增 amplificationpolymorphism，MSAP)是改 良的AFLP技 多态性 术，采用对基因组DNA 甲基化敏感性不同的2种限 中图分类号：Q74 制性内切酶HpalI和MspI代替AFLP分析中识别4碱 基的内切酶MseI，分别与识别6碱基的EcoRI配对 ， 随着城市化进程加速和工业生产的发展，越来 对5-CpCpGpG位点甲基化进行特异性扩增；这2种 越多的污染物进入环境，尤其是重金属离子，能长 酶都能识别并切割 CCGG序列，但对该位点胞嘧啶 期存 留于土壤和水体中，通过富集作用大量积累于 甲基化 的反应不同。HpalI对 CCGG中的任一个胞 植物体(包括其可食部分)，因而通过食物链进入人 嘧啶 甲基化都敏感 ，不能消化含 CCGG、C CGG 体危及健康。镉(Cd)是环境中主要的重金属污染物 和mCmCGG的位点，但对半 甲基化(即只有一条DNA 之一 ，其毒性大 ，蓄积性强 。它不是植物生长发 链的外侧胞嘧啶发生 甲基化)序列仍有酶切活性；而 育所必需的元素，但易被植物吸收，植物体吸收和 MspI对外侧胞嘧啶 甲基化敏感，即仅不能消化含 富集后会阻滞植物的生长发育(Hart等 1998)，通常 CCGG和mCCGG的位点，能切内甲基化(CCGG) 出现生长迟缓，植株矮小、褪绿、产量下降等症 序列，因而能够很好地反映基因组DN