免疫性肝损伤大鼠枯否细胞对肝星状细胞增殖的影响及芍药苷的作用.pdfVIP

安徽医科大学学报 ActaUniversitatisMedicinalisAnhui 2008Dec；43(6) ·679 · 免疫性肝损伤大鼠枯否细胞对 肝星状细胞增殖的影响及芍药苷的作用 李 响，刘 浩，路景涛，魏 伟 摘要 目的 探讨芍药苷 (Pae)通过免疫性肝损伤大 鼠枯 蛋 白酶 E、胶原酶IV、Nycodenz、MTT、脂多糖 (fJi． 否细胞 (KC)影响肝星状细胞 (HSC)的增殖能力。方法 用 p0p0lysacchade，LPS)均为美 国 sigma公 司产品； 卡介苗加脂多糖诱导大鼠肝损伤模型，肝脏原位灌流分离大 TBD胎牛血清、新生牛血清为杭州四季青公司产 鼠KC和HSC，观察共培养的形态学改变 ，观察Pae作用后的 品；ALT、AST检测试剂盒为南京建成生物工程研究 KC培养上清对 HSC增殖的影响。结果 免疫性肝损伤大 所产品。 鼠KC能明显促进 HSC的增殖 ，在Pae作用后 ，KC培养上清 1．2 方法与步骤 能抑制 HSC的增殖。结论 KC是 Pae发挥作用的靶细胞 1．2．1 大鼠免疫性肝损伤模型的诱导 于造模第 之一 ，Pae可通过作用于KC抑制HSC的增殖。 主题词 枯否细胞 ；细胞增殖 1天，模型组大鼠经尾静脉注射终浓度5 L卡介苗 自由词 免疫性肝损伤 ；芍药苷；肝星状细胞 1．6nil，正常组大鼠注射等体积的生理盐水；于第 11 中图分类号 R329．24；R575 天，模型组大鼠腹腔注射LPS30 g／kg，禁食 12h， 文献标识码 A 文章编号 1000—1492(2008)06—0679—04 经股动脉采血进行血清酶学指标检测，取小块肝脏 组织立即用 10％福尔马林固定进行病理检测，24h 白芍总苷(totalglucosidesofpaeony，TGP)是传 体外进行肝脏原位灌流。 统白芍干燥根中提取的有效部位。芍药苷 (paeoni— 1．2．2 HSC、KC的分离、培养及鉴定 采用肝脏原 florin，Pae)是 TGP的主要有效成分，本所以往研究 位灌流方法 ，Nycodenz密度梯度离心进行分离， 表明，TGP对化学性和免疫性肝损伤及肝纤维化具 取少量KC印度墨汁吞噬 J、HSC荧光显微镜下观 有明显的治疗作用 -6]，Pae对小 鼠免疫性肝损伤 测鉴定，细胞计数，HSC用含 20％新生 牛血清 亦具有保护作用 J，但其作用机制 尚不完全清楚， DMEM培养液、KC用含 10％胎牛血清的 RPMI一 本实验在研究免疫性肝损伤大鼠枯否细胞 (kupffer 1640培养基分别培养，置37℃5％CO培养箱内培 cell，KC)对肝星状细胞 (hepaticstellatecell，HSC)增 养使其贴壁，KC12h后、HSC48h后换液。每2天 殖作用的同时观察芍药苷对其的影响。 换培养液 1次。 1．2．3 HSC与KC的共培养 依据 KC占肝细胞 1 材料与方法 15％_】、HSC为5％ ～8％比例 ，以0．125％胰酶 1．1 动物与试剂 sD大鼠，体重 300～350g，雄 消化HSC，用含5％NBS的DMEM培养液混悬，进行 性，由安徽医科大学实验动物中心提供，清洁级。 细胞计数后浓度调整到2X10，接种到培养 7d的 Pae由安徽医科大学临床药理研究所提供，纯度 KC细胞共培养，每2天更换一半含有 10％胎牛血 90％；卡介苗 BCG为卫生部上海制品所产品；链霉