p38 MAPK介导E1A激活基因阻遏子蛋白调控人血管内皮细胞凋亡.pdfVIP

中国病理生理杂志 ChineseJournalofPathophysiology 2011，27(7)：1329—1334 · 1329 · [文章编号] 1000—4718(2011)07—1329—06 p38MAPK介导 E1A激活基因阻遏子 蛋 白调控人血管 内皮细胞凋亡珠 王 娜 ， 韩雅玲 ， 陶 杰， 闫承慧 (沈阳军区总医院全军心血管病研究所，辽宁 沈阳110840) [摘 要】 目的：研究E1A激活基因阻遏子蛋白(CREG)在依托泊苷 (VP一16)诱导的人脐静脉内皮细胞 (HUVECs)凋亡中的作用及其调控机制。方法：将体外培养的原代HUVECs用pLNCX—CREG和pLXSN—shRNA — CREG反转录病毒真核表达载体分别转染 ，通过G418(800mg／L)和嘌呤霉素 (2．5mg／L)筛选分别获得CREG 过表达组HUVECs(H—C)和CREG低表达组HUVECs(H—s)。在H—C、HUVECs(H)和H—S3种细胞模型中 加入凋亡诱导剂VP一16(100I~mol／L，6h)，用TUNEL法和流式细胞术检测细胞的凋亡情况；用Westernblotting检 测细胞中磷酸化p38MAPK (P—p38MAPK)的蛋白表达量；应用p38特异性抑制剂 SB203580(20p．mol／L)预处 理 H—S细胞后，检测VP—l6刺激诱导的细胞凋亡情况。结果：HUVECs经pLNCX—CREG和pLXSN—shRNA— CREG反转录病毒真核表达载体转染获得稳定的细胞克隆。经 Westernblotting证实，与HUVECs对照比较，H—C 组细胞 CREG表达明显增加至 160％，而H—S组细胞中的CREG表达下降约70％。加入凋亡诱导剂VP一16(100 ixmol／L，6h)后 ，TUNEL和流式双荧光染色检测结果均提示H—s中的细胞凋亡率明显升高，而H—C组细胞凋亡 率较HUVECs对照组明显降低，两者具有显著差异。进一步应用Westernblotting分析显示经VP—l6刺激后 ，H—s 细胞中P—p38蛋白表达较HUVECs和H—C组细胞显著增加；在H—S中添加 SB203580(2O~mol／L)后，VP一16 诱导的细胞凋亡现象被显著抑制。结论 ：CREG过表达可能通过抑制p38MAPK的激活阻遏 VP一16诱导的HU- VECs凋亡。 [关键词] EIA激活基因阻遇子；细胞凋亡 ；p38；人脐静脉内皮细胞 [中图分类号] R363 [文献标识码] A doi：10．3969／j．issn．1000—4718．2011．07．015 CREG preventshumanumbilicalveinendothelialcellsfrom apoptosisby inhibitingp38MAPK activation WANGNa，HANYa—ling，TAOJie，YANCheng—hui (ShenyangGeneralHospital，CardiovascularInstituteofPLA，Shenyang110840，China．E—mail：hanyal@263．net) [ABSTRACT] AIM：TostudytheeffectofcellularrepresserofE1A—stimulatedgenes(CREG)anditsmecha- nismonapoptosisofhumanumbilicalveinendothelialcells(HUVECs)inducedbyetoposide(VP一16)．METHODS： PrimaryHUVECswerecultured．RetroviraIeukaryoticexpressionvectorspLNCX —CREG andpLXSN —shRNA —CREG weretransfectedintoHUVECs．ThestablecellclonewasselectedandobtainedbyscreeningwithG418(800ms／L)nad thepuromycin(2