反式白藜芦醇对破骨细胞分化的影响.pdfVIP

第 36卷 第6期 河南师范大学学报 (自然科学版) Vr0Z．36 N o．6 2Do8年 11月 JoMrnnzo Hen船NormnzU挖iersit (Nn执razSciece) N0u 2OO8 文章编号 ：1O00—2367(2OO8)O6一Ol14一O3 反式 白藜芦醇对破骨细胞分化的影响 裴凌鹏 (中央民族大学 少数民族传统医学研究院，北京 1OOO81) 摘 要：目的：研究反式白藜芦醇对体外破骨细胞分化的影响．方法 建立由骨保护素配体(RANKL)和巨噬细 胞集落刺激 因子 (M—csF)共同细胞 因子的小 鼠破骨细胞骨髓诱导体系，将不 同浓度 的反式 白藜芦醇作用于破骨细 胞 ．受试细胞分为对照组、反式 白藜芦醇低剂量组(1O mo1．L )、反式 白藜芦醇 中剂量组 (1O mo1．LI1)和反式 白藜芦醇高剂量组(1O mo1．L )，并设立空 白对照组．7d后取细胞玻片进行抗酒石酸酸性磷酸酶 (TRAP)染色， 观察破骨细胞并计数 ；测量抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)活性 以及破骨细胞表面 NF_B活化受体 (RANK)mRNA 表达量 ．结果 诱导培养 的破骨细胞形态特征 明显；反式 白藜芦醇中、高剂量组在细胞数量、TRAP活性上与对照组相 比有 明显统计学差异(PO．O5)；反式 白藜芦醇各剂量组在 (RANK)mRNA表达量上与对照组相 比有 明显统计学差 异 (PO．05)，且呈量效关系．结论 ：反式 白藜芦醇可以抑制体外培养的破骨细胞分化． 关键词：反式 白藜芦醇；破骨细胞；细胞分化；骨质疏松症 中图分类号 ：Q254 文献标识码 ：A 天然 白藜芦醇主要 以苷的形式存在 ，常见 的是一种在其侧链结合一个糖基的白藜芦醇苷 ，又称为虎杖 苷Ⅲ．研究表明人体肠内葡萄糖苷酶可将 白藜芦醇苷水解成反式 白藜芦醇 ，后者具有抗氧化作用、防止高血 压及动脉硬化、活血化瘀、提高机体免疫力、防止骨质疏松、抗菌等多种药理作用Ⅲ．本实验 旨在观察此类化 合物对破骨细胞分化 的影响． 1 材料与方法 1．1 主要仪器和试剂 C30柱 (YMCCarotenoidS-5，waters)，HPLC(waters6O0E溶剂输送系统 ，PDA一2996二极管阵列检测 器)，四川产虎杖 (北京同仁堂药店)，反式 白藜芦醇 (sigma公司)，DMEM培养基 、胎牛血清 (美 国G．bco公 司)，RANKL，M—CSF(迪马公司)，TRAP检测试剂盒 (南京建成)，RT—PCR试剂盒 (Promega公司)，DNA Marker(大连 TaKaRa生物技术公司)． 1．2 虎杖反式白藜芦醇的提取 将虎杖饮片粉碎至 80目，取 10g虎杖粉和 5OmL体积分数为 95 乙醇一起捣碎 ，负压抽滤，收集滤 液．滤渣用同样乙醇反复抽提 5次，合并滤液，浓缩至原体积的 1／4． 1．3 反式白藜芦醇鉴定 根据其 HPLC中保留时间和紫外可见吸收光谱的特征峰与标准品对照进行鉴定．所得反式 白藜芦醇提 取纯度为 95 ．色谱条件 ：色谱柱为DiamonsilC18(4．6mm×25Omm，5 m)；流动相中A液为 7．5％乙腈 和 0．19／6的三乙胺水溶液 ，B液为 1OO 乙腈 ，梯度洗脱 ，20min内由 1O0 A液变为 1O0 B液 ；流速为 O．6mI ·min_。，紫外可见光检测器波长为 3O8nm检测 ，进样量 2O似L． 1．4 破骨细胞分离和培养 4周龄雄性小 鼠5只(均 由中国医学科学院实验动物 中心提供)，体重2O～25g．处死后75 乙醇泡 收稿 日期 ：2O07一 ¨一O7；修 回日期 ：2O08—08～2O 基金项 目：国家 自然科学基金 (3O171169) 作者简介：裴凌鹏(1976一)男，北京人 ，中央民族大学讲师，博士 ，研究方 向：天然药物化学与临床医学 第6期 裴凌鹏 ：反式 白藜芦醇对破骨细胞分化的影响 5min．无菌条件下分离股骨 ，剪断两侧骨骺端 ，用注射针头将 DMEM(1O0U ·mL 青霉素 ，1O0 g·mL 链霉素，2m