羊草乙醛脱氢酶基因LcALDH的克隆与表达分析.pdfVIP

第 2O卷 第 4期 草 业 学 报 187— 193 V01．2O。No．4 ACTA PRATACULTURAESINICA 2011年 8月 羊草 乙醛脱氢酶基因LcALDH 的克隆与表达分析 李新玲，吴姝菊 ，王全伟 (哈尔滨师范大学生命科学与技术学院，黑龙江 哈尔滨 150025) 摘要 ：采用 RACE技术从羊草 中克隆了乙醛脱氢酶基 因LcALDH 的 cDNA(GenBank登录号 EF492o45)。长为 1712bp的LcALDH cDNA序列含有编码 500个氨基酸 的 1503bp的开放读码框 、66bp的5非翻译区和 144bp 的3非翻译区。氨基酸序列 中含有醛脱氢酶家族绝对保守的谷氨酸活性位点和半胱氨酸残基活性位点。分析 LcALDH基 因在不 同胁迫条件下的表达情况 ，结果表明，LcALDH 的表达受到低温、干旱、高盐和 ABA 的正调控 作用 。研究结果为进一步从分子水平探 明羊草的抗逆机制 ，挖掘并利用植物抗逆基 因奠定基础。 关键词 ：羊草 ；乙醛脱氢酶 ；抗逆性 中图分类号 ：Q943．2；$543_’．903．53 文献标识码 ：A 文章编号 ：1004—5759(2011)040187—07 各种逆境条件如干旱、高盐 、低温、水淹或重金属等环境胁迫，都可以使活性氧物质 (reactiveoxygenspecies， ROS)在植物细胞中快速、大量的积累 ，从而造成氧化胁迫 。氧化胁迫的危害包括 2个方面 ：一方面是活性氧物质 直接损伤蛋白质、氨基酸和核酸，并导致膜脂的过氧化反应l1 ；另一方面是膜脂 的过氧化反应能产生一些如醛 类 、烃类、酮和羟酸类等高活性的、有毒的化学物质，毒害细胞甚至导致细胞死亡[3]。醛是膜脂过氧化反应的主 要产物 ，是一种活性氧诱导 的高毒性物质 ，它对核酸 、氨基酸和蛋白质等会造成严重伤害 ]，最终导致细胞死亡 。 醛脱氢酶是生物体 内活性氧物质清除过程 中一类重要 的酶类 ，它可以催化有毒 的醛类氧化 ，形成对应 的无毒羧 酸，维持生物机体中醛类物质的微量平衡 ]。乙醛脱氢酶 (aldehydedehydrogenase，ALDH)能够催化 乙醛、正丁 醛 、肉桂醛、苯 甲醛等有毒醛类进行快速脱氢 ，其活性 的增强代表植物机体对醛解毒的防御机制进一步增强[8]。 迄今 已从拟南芥 (Arabidopsisthaliana)、烟草 (Nicotianatabacum)、水稻 (Oryzasativa)、小麦 (Triticumaesti— rum)、大豆 (Glycinemax)、玉米 (Zeamays)、大麦 (Hordeumvulgare)、高粱 (Sorghumbicolor)、苔藓 (Bryophy— ta)等多种植物 中分离到 了乙醛脱氢酶基因的编码序列 ，其中一些植物的乙醛脱氢酶基因经分析认为，其受干旱 、 高盐 、ABA、紫外线辐射等非生物胁迫的诱导且上调表达_9 。羊草 (Leymuschinensis)为东北松嫩草原 的建群 种 ，是一种耐逆性很强的优 良牧草 ，也是分离抗逆基 因和研究植物抗逆机制 的良好植物材料_l1¨]。本实验从灰 绿色羊草 中分离得到 了乙醛脱氢酶基因LcALDH，研究了其表达模式，并对其功能进行 了生物信息学分析和预 测 ，对于研究羊草乙醛脱氢酶基因家族具有重要意义 ，为进一步挖掘其他重要抗逆功能基因在羊草中的表达和调 控机制奠定了基础 。 1 材料与方法 1．1 植物材料与逆境胁迫处理 灰绿型羊草种子 ，于 2007年由黑龙江省农业科学院草业研究所提供。羊草种子经 0．1 HgC1消毒后 ，用清 水冲洗干净并播种在蛭石 中，人工覆盖塑料薄膜培养 。出苗后 ，每 2d浇 1次 Hoagland全营养液 ，待小苗长至 4 叶期时选取长势一致的羊草 12盆，随机分为 4组，其中 1组为对照(CK)，单纯用 Hoagland全营养液浇灌，其他 4组分别进行高盐处理 (500mmol／LNaC1)、PEG(polyethyleneglycol6000)干旱处理 (20 )、低温处理 (4℃)和 ABA(abscisicacid，脱落酸)处理 (100l／mol／L叶片喷施)，处理后 2，