野生天门冬遗传多样性的ISSR分析.pdfVIP

· 生物技术 · 北方 园艺2o11(16)：164～166 野 生 天 门冬 遗 传 多样 性 的 ISSR 分 析 欧 立 军 。矗，王 俞 人 ，刘 佳 蒙 ，王 敏 (1．怀化学院 生命科学系 ，湖南 怀化 418000；2．怀化学院 民族药用植物资源研究与利用湖南省重点实验室，湖南 怀化 418000； 3．怀化学院 湘西药用植物与民族植物学湖南省高校重点实验室 ，湖南 怀化 418008) 摘 要：通过 ISSR技术对 19个野生天门冬居群共 67个个体进行遗传多样性分析。结果表 明：用 13个随机引物共扩增出 125条清晰条带，其 中 92条具多态性，平均多态性位点比率为 73％，建立了不同居群的ISSR标记；Nei’S基因多样性指数 H一 0．19，Shannon’S多样性指数 J一 0．30，遗传分化指数 一0．8206。聚类分析表明，青海、云南和贵州省的5个居群聚为一大支， 其它居群为另一大支。野生天门冬种 内具有较高的遗传多样性，遗传变异主要存在 于居群问； ISSR标记可以作为研究天门冬遗传多样性及居群鉴定的有效标记。 关键词：天门冬；居群)ISSR)遗传多样性 中图分类号：S567．239 文献标识码：A 文章编号：1001--0009(2011)16—0164一O3 天门冬(AsparaguscochinchinensisLour．Merr．)是 德 国产 MastercyclergradientPCR仪，Tanon4100 治疗肺燥 、干咳、咽干 口渴、肠燥便秘等症的 良好药 凝胶成像系统 。IssR引物由上海生工合成 ，PCR相关 材l1]，是 《中国药典》记载的传统 中药 ，同时也是多个民 试剂产 自北京天根生化科技有限公司。 族的常用药。我国大多省都有分布，主产于贵州、云南 2 结果与分析 和湖南等省，道地产区不明确。天门冬药材主要利用 2．1 lSSR引物的筛选 野生资源，随着需求量的增大，野生资源 Et益枯竭 ，人 ISSR-PCR反应所用的引物 由上海生工公司合成， 工栽培种植是解决紧缺的有效途径，确定天门冬药材 共从 5O个随机引物 (17～18bp)中筛选出 13个扩增 的道地产区是人工引种栽培的重要前提。 条带清晰、多态性明显、反应稳定 的引物用于 19个居 ISSR(Intersimplesequencerepeat，简单重复间隔 群的 67个个体的扩增，每个选定的引物至少重复扩增 序列)标记是以PCR技术为基础的分子生物学技术， 2次 ，每条引物退火温度都单独摸索得到(表 2)。 具有模板需要量少、结果便于分析、引物设计简单等特 表 1 用于 ISSR分析的不同居群天门冬 点 ]，广泛应用于物种鉴定、遗传作 图、基因定位、系统 发育与进化等领域L3]。天门冬的形态结构简单，其药 用部位块根形态相近，传统的形态学方法很难将不同 产地的天门冬药材严格地区分，运用分子标记技术是 其鉴定的重要手段 。该研究运用 ISSR-PCR技术对 19 个野生天门冬居群的 67个个体进行分析，揭示不同产 地天门冬的亲缘关系，了解其种 内变异，建立不同居群 天门冬的分子标记 ，为鉴定和区分不同居群天门冬提 供理论基础 。 1 材料与方法 2009~2010年 ，采集野生天门冬的 19个居群 ，各 表 2 筛选的天门冬 ISSR引物和最佳退火温度 居群随机选取 3～5个样本，栽培于怀化学院生命科学